[发明专利]一种在小鼠前扣带回皮层诱发DSE现象的方法

摘要

本发明公开了一种在小鼠前扣带回皮层诱发DSE现象的方法，该方法包括以下步骤：制备脑薄片；电生理记录；结果判断。本发明的诱导方法具有快速简便、成功率高、操作易行的优点。不需要利用其他受体的激动剂或拮抗剂，孵育及记录液体接近生理状态，更加利于模拟在体情况。成功率高，利用本法在细胞状态好、刺激电极诱导效率高且刺激位置准确的情况下，成功率高达95％以上，因此更加利于比较各种病理模型条件下DSE现象的增强、减弱或消失。本法对于在前扣带回皮层水平诱导DSE具有较高的研究意义，适于推广应用。

主权项

1.一种在小鼠前扣带回皮层诱发DSE现象的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1.制备脑薄片将动物麻醉后取出的脑，利用振动切片的方法进行冠状切片；切片厚度为300um，选取bregma 0.50‑1.10之间的脑片，孵育2小时；步骤2.电生理记录灌流液中加入GABA受体拮抗剂荷包牡丹碱；记录L2/3层神经元：记录电极置于L2/3，刺激电极置于L5/6；记录L5/6层神经元：记录电极置于L5/6，刺激电极置于L2/3；记录方法：电压钳记录，钳制电压为‑70mV，记录5‑10分钟基线，给予0.2Hz刺激，控制诱发的EPSC在200pA；而后将钳制电压调至0，给予去极化2s；去极化结束后立即给予0.2Hz刺激；记录结束后，记录细胞被动膜特性；步骤3.结果判断在上述的记录过程中，基线上下浮动不超过10％视为稳定记录，进一步进行分析；去极化诱导后，细胞漏流的大小小于100pA，纳入分析；若去极化后20s内出现了EPSC减小，减小幅度约为20％；20s后EPSC恢复正常基线水平，即视为成功诱导DSE现象；步骤1所述动物为成年C57BL/6小鼠，年龄大于8周；步骤2中所使用的记录液体配方为：氯化钠126mM，氯化钾2.5mM，氯化钙2.4mM，氯化镁1.2mM，磷酸二氢钠1.2mM，碳酸氢钠19mM，葡萄糖11mM，并以95％O₂和5％CO₂孵育，pH为7.35‑7.45；步骤2中的所述记录电极的内液配方为：葡萄糖酸钾125mM，氯化钠10mM，氯化镁2.0mM，氯化钙1.0mM，乙二醇二乙醚二胺四乙酸10mM，羟乙基哌嗪乙硫磺酸10mM，三磷酸腺苷2.0mM，三磷酸鸟苷0.3，pH为7.3，渗透压为285‑295mOsm/kg；步骤2中记录时的记录温度为30‑34℃。