[发明专利]一种基于实时荧光PCR技术快速筛查黄瓜中病原微生物的方法

摘要

本发明公开了一种基于实时荧光PCR技术快速筛查黄瓜中病原微生物的方法，该方法结合传统细菌培养法，以水煮法提取选择性增菌后黄瓜中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157:H7和单增李斯特氏菌的细菌基因组DNA，应用实时荧光PCR技术对四种食源性致病菌进行快速筛查。本发明采用的DNA提取方法，30min内即可完成样品DNA提取的全过程，实时荧光PCR方法，90min内可完成样品的全过程鉴定，具有高效、快速、实时、操作简便等优势，为生鲜果蔬黄瓜中食源性致病菌的快速筛查提供了技术支撑。

主权项

用于鉴定四种食源性致病菌的PCR扩增引物及探针引物，其特征在于，包括沙门氏菌引物正向序列：5′‑GCGGCGTTGGAGAGTGATA‑3′，反向序列：5′‑AGCAATGGAAAAAGCAGGATG‑3′，探针序列：5′‑FAM‑CATTTCTTAAACGGCGGTGTCTTTCCCT‑TAMRA‑3′；金黄色葡萄球菌引物正向序列：5′‑TTCTTCACGACTAAATAAACGCTCA‑3′，反向序列：5′‑GGTACTACTAAAGATTATCAAGACGGCT‑3′，探针序列：5′‑FAM‑CAGAACACAATGTTTCCGATGCAACGT‑TAMRA‑3′；大肠杆菌O157:H7引物正向序列：5′‑TCCTCAGCTATAGGGTGCTTTTG‑3′，反向序列：5′‑ATCGAAACAAGGCCAGTTTTTTAC‑3′，探针序列：5′‑FAM‑TATTTTTCCGAGTACATTGGCATCGTGTGG‑TAMRA‑3′；单增李斯特氏菌引物正向序列：5′‑CTGAATCTCAAGCAAAACCTGGT‑3′，反向序列：5′‑CGCGACCGAAGCCAACTA‑3′，探针序列：5′‑FAM‑ATACGATAACATCCACGGCTCTGGCTGG‑TAMRA‑3′。