[发明专利]土壤微生物毒性试验中硝酸盐含量测定方法及其应用

摘要

本发明公开了一种土壤微生物毒性试验中硝酸盐含量测定方法，通过采用一种新的土壤预培养方法，结合对现有硝酸盐含量测定方法的改进，使该测定方法适用于土壤微生物毒性试验。本发明还公开了一种所述土壤微生物毒性试验中硝酸盐含量测定方法的应用。采用本发明，具有操作简便、重复性好、稳定性高、准确度和精密度高的特点，对正确评估化学品或农药对土壤微生物的毒性效应至关重要。

主权项

1.土壤微生物毒性试验中硝酸盐含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：称取10g土壤样品于三角瓶中，加入0.1g CaSO4·2H2O和50mL去离子水，混合均匀得到混合液；步骤2：将所述混合液在150rpm转速，18‑22℃温度范围的恒温摇床上振荡60min，结束后沉淀12‑18min；步骤3：取上清液在10000rpm高速冷冻离心机下离心5‑10min，离心后用滤纸过滤1‑2次；步骤4：取上清液于100mL蒸发皿中，向其中加入0.05gCaCO3，随后水浴蒸干至干燥；步骤5：冷却，迅速加入2mL酚二磺酸试剂，将皿旋转，使试剂接触到所有的蒸干物；步骤6：静置反应10min后，加入20mL去离子水，用玻璃棒搅拌直到蒸干物完全溶解；冷却后缓缓加入1：1氨水并不断搅拌均匀，至溶液呈黄色再多加2mL，以保证氨水过量；步骤7：将溶液转移至100mL容量瓶中，用去离子水定容至体积，得到显色液；步骤8：将显色液通过分光光度计在波长420nm处进行比色，测得显色液的吸光度，以去离子水做参比，调节仪器零点；步骤9：通过测得的吸光度从NO3‑－N标准曲线中找出显色液的硝态氮浓度，并计算得出土壤中硝酸盐含量；所述步骤1中的土壤样品需经过土壤采集、处理、理化指标测定以及预培养的过程后制得；所述土壤预培养包括以下步骤：称取试验所需的土壤重量，按照每千克土壤用苜蓿粉5g的比例加入有机底物紫花苜蓿，进行碳调节，混合均匀后，加去离子水调节土壤含水量为最大持水量的40％‑60％，置于温度为20℃±2℃、黑暗的环境中培养2d‑28d。