[发明专利]一种猪CIK细胞的制备方法

摘要

本发明提供一种猪CIK细胞的制备方法，该方法主要包括收集外周血淋巴细胞层，并对收集的外周血淋巴细胞进行诱导培养，该方法通过对CIK细胞制备方法进行优化试验，建立了适用于猪CIK细胞的培养体系，利用该培养体系培养猪外周血淋巴细胞5d后，可以使体系中淋巴细胞的总数增长近16倍，利用该培养体系可以为体外细胞免疫试验提供大量的具有NK细胞表型的免疫细胞。

主权项

1.一种猪CIK细胞的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：S1：采用浓度为1.110ng/L的Percoll密度梯度离心法分离猪血液内的外周血淋巴细胞，收集外周血淋巴细胞层，用PBS洗涤2次，备用；S2：向步骤S1分离的外周血淋巴细胞中按终浓度加入1000U/mL的IFN‑γ和200‑300ng/mL的完全培养基，置于培养箱中培养24h后，按终浓度补加50ng/mL的CD3和1000u/mL的IL‑2；每2‑3天添加完全培养基和IL‑2，并保持完全培养基的终浓度为200‑300ng/mL，IL‑2的终浓度为1000u/mL，培养3‑10天，制得CIK细胞；所述制备方法还包括向完全培养基中加入培养溶质；所述培养溶质包括重量份数为0.5‑1.5份的甲壳素、0.1‑0.3份的聚甲基丙烯酸甲酯、0.4‑0.7份的氧化铁、5‑10份的多聚谷氨酸和1‑3份的阿拉伯胶。