[发明专利]一种红茄下胚轴离体培养再生体系的建立方法

摘要

本发明公开了一种红茄下胚轴离体培养再生体系的建立方法，采用下胚轴作为茄子再生体系外植体，在含有NAA和6‑BA的愈伤组织诱导培养基上诱导出愈伤组织；然后，在含有NAA、ZT和6‑BA的分化培养基上诱导出芽；再于1/2MS的生根培养基上诱导生根，获得再生幼苗，驯化移栽后发育成正常植株。本发明建立的再生体系，在优选条件下，愈伤组织诱导率高，最高达到100％，生根率高，最高可达到55％。本发明提供的建立稳定的离体培养再生体系的方法，为茄子遗传转化研究奠定基础。

主权项

一种红茄下胚轴离体培养再生体系的建立方法，其特征在于，包括如下四个步骤：1)培养红茄无菌苗，获得下胚轴：筛选饱满且颗粒大的红茄种子，在55℃的水浴锅中水浴10～15min后，用75％酒精消毒30～60s，然后放到10％NaClO溶液中浸泡20～30min，期间不断摇动，用无菌蒸馏水冲洗4～5遍，再用无菌滤纸吸干种子表面水分，放入1/2MS+20g/L蔗糖+7g/L琼脂的培养基上，pH值为5.8，进行培养，光照强度为2000lx，光照时间为16h/d，温度条件为25℃。待红茄幼苗长出两片子叶，第一片真叶露心时，即得红茄无菌苗；2)诱导出愈伤组织：诱导培养基为MS+0.1‑0.2mg/L NAA+1.0‑2.0mg/L6‑BA，pH值为5.8，将无菌苗的下胚轴作为外植体，去掉胚根与上部后切取0.5～1cm小段，横向放置在培养基上进行诱导愈伤组织；3)不定芽进行分化：诱导不定芽所使用的分化培养基为：MS+0‑0.3mg/L IAA+0‑2.0mg/L 6‑BA+0‑0.5mg/L ZT，pH值为5.8，在外植体脱分化成功并出现嫩绿的愈伤组织后，将其接种到分化培养基中诱导生芽；4)诱导不定根，驯化移栽，获得红茄再生植株：诱导不定根所使用的生根培养基为1/2MS+0‑0.1mg/L IAA或MS+0‑0.1mg/L IAA，pH值为5.8，当分化的不定芽长到1.5～2.0cm时，不带愈伤组织将其从基部切下，接种到生根培养基中诱导生根；驯化移栽为：当幼苗根系生长发达后，揭开培养瓶的瓶盖，放入培养箱进行3d炼苗，然后用流水对幼苗根部进行清洗，再移栽到盛有灭菌基质的营养钵中，保湿培养两周后，发育成正常植株。