[发明专利]一种上皮细胞的扩增制备方法

摘要

本发明公开了一种上皮细胞的扩增制备方法，按照如下步骤进行：无菌条件下将奶牛乳腺组织块洗涤并剪碎，加入胰酶液消化一定时间，之后将奶牛乳腺组织悬液离心后弃上清液，加入上皮细胞培养液中重悬后过滤，将过滤后的培养液接种培养皿中，置于培养箱中培养；原代培养60‑72h后吸去培养液，加入胰蛋白酶‑EDTA溶液消化后离心并接种于培养皿中，置于培养箱中进行传代培养。本发明中提出的一种上皮细胞培养液，在培养液中加入IGF‑Ⅱ、催乳素、孕酮和亚油酸，IGF‑Ⅱ与催乳素可以刺激β‑乳球蛋白和β‑酪蛋白的表达，孕酮可以促进乳腺组织发育成熟，维持妊娠和泌乳，亚油酸可以诱导乳腺上皮细胞的生物活性，所配置的培养液对上皮细胞的体外培养具有促进作用。

主权项

一种上皮细胞的扩增制备方法，其特征在于按照如下步骤进行：步骤(1)、配置上皮细胞培养液；步骤(2)、无菌条件下将奶牛乳腺组织块洗涤并剪碎；步骤(3)、将所述步骤(2)中剪碎的奶牛乳腺组织块加入胰酶液消化一定时间后，用所述步骤(1)中配置的上皮细胞培养液终止消化，得到奶牛乳腺组织悬液；步骤(4)、将所述步骤(3)中的得到的奶牛乳腺组织悬液离心后弃上清液，得到乳腺上皮细胞群；步骤(5)、取所述步骤(4)中得到的乳腺上皮细胞群加入所述步骤(1)中制得的上皮细胞培养液中重悬后过滤，将过滤后的培养液以1×10⁵个/mL接种于10cm×10cm培养皿中，置于37℃、5％CO₂培养箱中培养；步骤(6)、原代培养60‑72h后吸去培养液，用hank's液清洗细胞，加入胰蛋白酶‑EDTA溶液消化5‑10min，加入所述步骤(1)中配置的上皮细胞培养液终止消化，细胞悬液离心后以2×10⁵个/mL接种于10cm×10cm培养皿中，置于37℃、5％CO₂培养箱中进行传代培养。