[发明专利]一种适用于干细胞的线粒体分离方法

摘要

本发明提供一种用于高效分离干细胞活性线粒体的方法，包括如下步骤：1）将间充质干细胞检测表面标记鉴定，向骨、软骨和脂肪分化能力鉴定；2）胰酶消化，离心收集细胞；重悬清洗离心；3）配制线粒体提取液：A液是裂解液，C是终止反应液。4）A液重悬清洗过后的细胞沉淀进行涡旋、静置，重复数次；加入C液中止裂解，离心得白色沉淀留待第5步操作；上清液再离心得白色沉淀；5）第4步中首次离心的沉淀，重复第4步的操作；6）将第4步和第5步的白色沉淀放在一起，离心得白色沉淀，立即使用或者‑80度保存。本发明方法分离获得的线粒体活性好、纯度高，适用于间充质干细胞分离获得线粒体，且操作简便、不需要研磨。

主权项

一种适用于干细胞的线粒体分离方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：1）将传代扩增P₁~P₃代的间充质干细胞，采用流式细胞仪检测表面标记鉴定，进行向骨、软骨和脂肪分化能力鉴定；2）间充质干细胞经过胰酶消化，离心收集细胞；用PBS重悬清洗离心数次；3）采用细胞线粒体提取试剂盒，根据试剂盒的操作手册，计数细胞数量，以确定要配制的线粒体提取液的用量，将线粒体提取液放在碎冰上进行配制；4）取A液重悬PBS清洗过后的细胞沉淀，转移到EP管中，涡旋，碎冰上静置，重复数次；然后，加入C液中止裂解，用移液枪头轻柔的混合均匀，立即离心，管里的沉淀留待第5步操作，先将上清液转移至新的EP管中，离心；离心后可以见到白色的沉淀，弃上清，用C液重悬沉淀；5）第4步中第一次离心下来的EP管中的沉淀，再用A液总共重悬，转移至新的EP管中，重复第4步的操作；6）将第4步和第5步的结果混合在一起，离心，离心后弃上清， C液重悬管底的沉淀，马上使用或者‑80度保存。