[发明专利]用紫花苜蓿‑印度梨形孢联合作用修复石油污染土壤的方法

摘要

本发明为一种用紫花苜蓿‑印度梨形孢联合作用修复石油污染土壤的方法。该方法包括以下步骤：(1)印度梨形孢培养及孢子悬浮液收集；(2)紫花苜蓿种子的培育；(3)印度梨形孢接种紫花苜蓿。本发明采用印度梨形孢孢子悬浮液对紫花苜蓿根部实施浇灌，印度梨形孢首先定殖于紫花苜蓿根部，植物与该内生真菌形成的菌根共生体既可以促进紫花苜蓿的生长，提高土壤生物活性和肥力，也能有效的降解土壤中的石油，降解率可达到78％。

主权项

一种用紫花苜蓿‑印度梨形孢联合作用修复石油污染土壤的方法，其特征为该方法包括以下步骤：(1)印度梨形孢培养及孢子悬浮液收集将活化后的印度梨形孢接种于固体CM培养基中培养，培养条件为23‑25℃，黑暗培养箱避光培养，3‑4周后收集孢子体：从CM培养基上收集孢子，然后将得到的孢子液过滤，再通过离心分离步骤，最后沉淀用体积百分浓度为0.05％Tween‑20溶液重悬菌体，得到浓度为1.0×10⁴～3×10⁴/mL的孢子悬浮液，备用；(2)紫花苜蓿种子的培育用蒸馏水将紫花苜蓿种子冲洗，再用体积百分浓度为75％的酒精浸泡3‑5min，然后再用蒸馏水冲洗，用体积百分浓度为25％的NaClO溶液浸泡15‑20min，经高压灭菌的蒸馏水冲洗后，放入4℃冰箱春化1‑2h；将种子种植到被石油污染的土壤中；培养条件为24‑26℃，16h光期、8h暗期，湿度60％‑70％，使紫花苜蓿种子萌发；(3)印度梨形孢接种紫花苜蓿一周后，待紫花苜蓿种子萌发完全，用步骤(1)所述的孢子菌液对紫花苜蓿根部进行浇灌，每棵植物根部浇灌3～5mL，每隔三天，再浇灌一次；共浇灌4～6次后，实施常规的水肥管理，使紫花苜蓿正常生长，从而最终使被石油污染的土壤得到修复。