[发明专利]金为核银为壳的“拉曼静默区”基底及其制备方法与应用

摘要

本发明属于生物大分子分离分析技术领域，具体为以金为核银为壳的“拉曼静默区”的表面增强拉曼散射基底及其制备方法和在活细胞中拉曼成像的应用。本发明制备过程包括：用水热法原位合成含有“拉曼静默区”探针分子的金纳米粒子，重溶于硼砂溶液，加入“拉曼静默区”分子（E）‑2‑((4‑(苯乙炔基)亚苄基)氨基)乙硫醇；然后将抗坏血酸及硝酸银加入，使其原位还原银纳米粒子；再加入了牛血清白蛋白,最后通过多巴胺的自聚合，将抗体连接到材料中，制备得可特异性识别肿瘤细胞的“拉曼静默区”的表面增强拉曼散射基底。实验表明，该表面增强拉曼散射基底对探针信号具有显著的增强效果，本发明的基底材料无模板，低成本，低毒性，将其应用于活细胞成像，新颖便捷，实用高效。

主权项

1.一种金为核银为壳的细胞“拉曼静默区”的表面增强拉曼散射基底的制备方法，其特征在于，具体步骤为：（1）（E）‑2‑((4‑(苯乙炔基)亚苄基)氨基)乙硫醇）的合成：在通有氩气的条件下，向三口烧瓶中加入1‑2 g浓度为8‑10 mM的碘苯、1‑2 g浓度为 8‑10 mM 的4乙炔基苯甲醛、500‑600 mg浓度为1‑2 mM的四三苯基膦钯以及50‑100 mL无水三乙胺，加料之后鼓入氩气排除装置内氧气，并将其放在油浴中加热至沸腾，维持持续加热6‑9 h,；反应结束后将溶剂旋干，得到中间产物4‑苯乙炔基苯甲醛；将此中间产物与400‑500 mg浓度为7‑9 mM的巯基乙胺、400‑500 mg浓度为3‑5 mM的干燥无水硫酸镁，以及10‑30 mL无水四氢呋喃，置于三口烧瓶中，常温反应搅拌4‑6h；反应结束后将其反应液旋干除去，洗涤，即得到（E）‑2‑((4‑(苯乙炔基)亚苄基)氨基)乙硫醇；（2）原位形成含有（E）‑2‑((4‑(苯乙炔基)亚苄基)氨基)乙硫醇的金纳米粒子：取1‑3 mL 浓度为8‑10 mg/mL的高氯金酸溶液及90‑100 mL的去离子水，并向其中加入8‑10 uL浓度为8‑10 mM的（E）‑2‑((4‑(苯乙炔基)亚苄基)氨基)乙硫醇, 混合均匀，放入120‑140℃的油浴中加热，控制其每秒钟回流一次，此时向其中加入600‑800 uL浓度为1‑3%的柠檬酸三钠，保持回流10‑30min，冷却至常温，得到带有（E）‑2‑((4‑(苯乙炔基)亚苄基)氨基)乙硫醇分子的金纳米粒子，将其储存在干净的玻璃瓶中，放于4‑8℃保存；（3）银壳的修饰：取步骤（2）中合成的带有（E）‑2‑((4‑(苯乙炔基)亚苄基)氨基)乙硫醇分子的金纳米粒子，采用转速6000‑8000 rpm对其进行离心5‑10min，吸取上层清液，重溶在硼砂溶液中，向其中加入 10‑20 uL浓度为 8‑10 mM的（E）‑2‑((4‑(苯乙炔基)亚苄基)氨基)乙硫醇，混合均匀后加入 3‑5 uL浓度为 1‑2 M的抗换血酸，并逐滴加入 80‑100 uL浓度为 8‑10 mM的硝酸银，最后加入8‑10 uL 浓度为5‑15 mg/mL 的牛血清白蛋白，得到金为核银为壳的拉曼基底；（4）抗体的修饰：采用醌基共价偶联的方法将抗体修饰于银壳表面；抗体偶联的方式如下，首先配制浓度在0.1‑1mg/mL的多巴胺溶液，并将其加入金为核银为壳的拉曼基底中，25‑37 ℃偶联12‑24 h，得到带有抗体的以金为核银为壳的拉曼基底，即金为核、银为壳的细胞“拉曼静默区”的表面增强拉曼散射基底。