[发明专利]一种胎盘绒毛板间充质干细胞及临床化制备方法

摘要

本发明公开了一种胎盘绒毛板间充质干细胞，其临床化制备方法包括以下步骤：(1)获取胎盘绒毛板；(2)去除血管和绒毛组织；(3)用无菌生理盐水清洗至没有血色；(4)将绒毛板组织剪成1‑5mm²，用生理盐水清洗；(5)将组织块接种于完全培养基中，于37℃、5％CO₂潮湿培养箱中培养；(6)每隔5‑10天更换一次培养基，当细胞融合度为70‑80％时，用TrypLE^TM Select消化细胞；(7)传化培养；(8)检测；(9)冻存；(10)建库。本发明以胎盘绒毛板为材料，提取过程中无需分选、浸泡、过滤和梯度离心，在较低代次可得到较多细胞，大大降低了成本消耗、分离时间，提高了间充质干细胞的产率和纯度。

主权项

一种胎盘绒毛板间充质干细胞的临床化制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采集母血，并进行传染病检测，然后取出胎盘，弃去覆盖在外侧的羊膜，剪取胎盘绒毛板；(2)剔除附着在胎盘绒毛板上的血管和绒毛组织；(3)用无菌生理盐水清洗步骤(2)所得的胎盘绒毛板至无血色；(4)将清洗后的绒毛板剪成1‑5mm²的组织块，然后用无菌生理盐水清洗2‑5次；(5)将步骤(4)中的组织块接种于完全培养基中，置于37℃、5％CO₂潮湿培养箱中培养；其中完全培养基成分为：无血清培养基、30ng/mL bFGF、体积浓度为2％的GlutaMAX；(6)每隔5‑10天更换一次培养基，当细胞融合度达到70‑80％时，用TrypLE^TM Select消化细胞；(7)传代培养：消化后进行离心处理，2000r/min离心3min，收集细胞，按1×10⁴‑2×10⁴个细胞/cm²的密度接种于T175培养瓶中，然后添加20mL完全培养基传代培养，得胎盘绒毛板间充质干细胞；(8)针对步骤(7)所得的胎盘绒毛板间充质干细胞，检测以下项目中的至少一项：细胞活性、无菌检测、细胞表面标志物检测、核性检测、HLA‑ABC/DR配型；(9)冻存：将传代培养所得的胎盘绒毛板间充质干细胞按2×10⁶‑8×10⁶个细胞/mL密度冻存于1mL冻存液中，冻存细胞经程序降温至‑80℃后转入液氮罐中长期保存；(10)建立包含以上信息的胎盘干细胞的数据库，并使该数据库与步骤(9)的冻存细胞进行关联。