[发明专利]一种复合医用生物蛋白胶的制备方法

摘要

本发明公开了一种复合医用生物蛋白胶的制备方法，属于生物胶制备技术领域。本发明取猪胎衣处理，干燥后与甘草混合碾磨，加入胰蛋白酶等酶解后，浓缩得浓缩液，与胰蛋白胨等混合杀菌消毒得培养基，接种枯草芽孢杆菌培养，再发酵后过滤得滤液，与山梨糖醇混合，经紫外线照射，加入氯化钙等微波反应，与无水乙醇混合过滤得滤渣，冷冻干燥制得复合医用生物蛋白胶。本发明的有益效果是：本发明制备步骤简单，所得产品降解性好，在组织内2～3个月完全吸收降解；所制得的凝胶液粘度高，与组织粘附性好，具有与组织相近似的韧性，组织变动时不易脱落，可有效防止细菌感染。

主权项

一种复合医用生物蛋白胶的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）使用水将猪胎衣表面血渍洗净，按固液比1:3，浸泡于pH为6.5磷酸盐缓冲液中，并置于超声振荡器中，在30～35KHz下振荡30～40min，再进行过滤，使用蒸馏水冲洗过滤后的猪胎衣，直至冲洗液呈中性，随后置于70℃烘箱中干燥5～6h；（2）按质量比1:1～2，取甘草及上述干燥后的猪胎衣放入碾磨机中进行碾磨，过200目筛，将过筛颗粒与其质量1.0～1.2％胰蛋白酶放入酶解罐中，再加入过筛颗粒质量2～4倍的质量分数为5％碳酸氢铵溶液，设定温度为35～38℃，酶解4～6h；（3）在上述酶解结束后将酶解罐中的酶解混合物移入真空浓缩罐中，浓缩至原体积的55～65％，得浓缩液，按重量份数计，取45～55份浓缩液、28～32份胰蛋白胨、34～36份酵母浸膏、10～15份血粉、2～4份异丙基‑β‑D‑硫代半乳糖苷、1～2份磷酸二氢钾及1.2～1.8份磷酸氢二钾，搅拌均匀，并杀菌消毒，得培养基；（4）按接种量10～15％，将枯草芽孢杆菌接种至上述培养基中，并置于恒温箱中，设定温度为36～38℃，培养14～16h，待培养结束后将上述制备的培养基倒入玻璃发酵罐中，设定温度为37℃，以120r/min搅拌发酵，待发酵罐中发酵物颜色不变时，对发酵罐内的发酵混合物进行减压过滤，收集过滤液；（5）将上述所得的过滤液与其质量16～23％山梨糖醇混合均匀，并放入紫外线下进行照射2～3h，再分别向其中加入过滤液质量0.9～1.2％乙二醇双（2‑氨基乙基醚）四乙酸及过滤液质量30～40％氯化钙，搅拌均匀，并放入微波反应器中，在功率200～300W下反应4～6h，随后再加入无水乙醇直至无沉淀产生，过滤收集滤渣，并使用无菌水冲洗直至冲洗液呈中性，将滤渣冷冻干燥，即可得复合医用生物蛋白胶。