[发明专利]一种高得率人原代软骨细胞制备方法在审
| 申请号： | 201610508748.1 | 申请日： | 2016-06-29 |
| 公开（公告）号： | CN106011055A | 公开（公告）日： | 2016-10-12 |
| 发明（设计）人： | 许学猛 | 申请（专利权）人： | 广东省第二中医院 |
| 主分类号： | C12N5/077 | 分类号： | C12N5/077 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司44245 | 代理人： | 雷月华 |
| 地址： | 510095*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明属于细胞体外培养领域，具体公开了一种高得率人原代软骨细胞制备方法。所述方法包括以下步骤：获取软骨组织，以眼科剪刀将软骨组织剪碎；加入胰酶消化，吸弃上清液；加入II型胶原酶消化过夜后，过滤，加入培养基终止消化，1000‑1500rpm离心5min，获取软骨细胞沉淀后种植于培养皿中培养，得到高得率人原代软骨细胞。本发明主要在于软骨组织块的剪碎和离心速度上进行改进。本发明通过将离心转速提高至1000‑1500rpm，既不至于破坏软骨细胞，又极大地提高了软骨细胞的得率。与传统的软骨细胞制备方法相比，本发明方法在软骨细胞的得率上提高了约3.55倍，且经实验验证所得软骨细胞有良好的细胞形态。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 率人原代 软骨 细胞 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种高得率人原代软骨细胞制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤(1)：取做膝关节置换手术病人的关节软骨，剔除干净软组织，剩余透明的软骨组织，然后放入盛有DPBS缓冲液的离心管中，振荡清洗，直至残留的血液漂洗干净；步骤(2)：以眼科剪刀将软骨组织剪碎成1mm×1mm碎片；步骤(3)：加入胰酶消化，吸弃上清液；然后加入0.02％(m/v)II型胶原酶，消化过夜后，细胞悬液过滤，加入含10％(v/v)FBS(胎牛血清)的高糖DMEM培养基终止消化，1000‑1500rpm离心5min，获取软骨细胞沉淀；步骤(4)：将软骨细胞沉淀种植于培养皿中，培养于含10％(v/v)FBS的高糖DMEM培养基中，得到高得率人原代软骨细胞。
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