[发明专利]一种用于脑肿瘤免疫治疗的多抗原检测方法

摘要

本发明公开了一种用于脑肿瘤免疫治疗的多抗原检测方法，包括：筛选脑肿瘤相关抗原；把需要检测的抗原基因序列，先利用编写的序列分析程序进行序列扫描，引物筛选，以设计各抗原基因特异性引物，然后进行脑肿瘤组织RNA提取和cDNA的获得，最后采用qRT‑PCR的方法检测模板质量和各抗原基因的表达情况，通过产物测序和序列分析对结果进行验证。此方法可以在短时间内灵敏检测出脑肿瘤组织中肿瘤相关抗原的表达情况，为脑肿瘤的靶向免疫治疗提供良好的依据；采用qRT‑PCR的方法，通过仪器直接读出各个抗原基因的扩增和表达情况，使结果更直接、简单、准确的呈现出来，扩增产物经过测序验证具有很好的特异性，确保qRT‑PCR检测的准确性和灵敏性。

主权项

一种用于脑肿瘤免疫治疗的多抗原检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1对脑肿瘤现有抗原进行调研，归纳总结出可以用于靶向免疫治疗的相关抗原，并找到各个抗原的基因序列；S2对相关抗原基因序列进行分析，采用了编写的序列分析程序local blast对各个抗原基因进行逐个碱基扫描，找到基因片段保守性较好的区域；S3针对保守性较好的基因片段设计出各个抗原基因的特异性引物，并用其和人基因组进行比对，防止扩增中非特异产物的产生；S4检测模板的获得，包括以下步骤：S41组织样品RNA的提取：取适量RNAlater保存的组织样品，参照TRIzol裂解法提取组织样品RNA；以及S42获得模板cDNA：以组织样品RNA为模板，oligo dT为引物进行RNA的反转录得到组织样品cDNA；S5抗原基因的检测：采用qRT‑PCR的方法，特异性检测各个抗原基因的表达情况，探知各相关肿瘤抗原在表达水平的变化，包括以下步骤：S51以步骤S4获得的cDNA为模板，以水为阴性对照，设置空白对照，进行qRT‑PCR扩增；以及S52根据仪器扩增情况，直接观测各抗原特异性引物扩增情况，并根据脑组织中GAPDH的表达情况，得出各个抗原相对的表达情况；S6检测结果的测序验证：qRT‑PCR的产物直接测序验证qRT‑PCR的检测结果。