[发明专利]一种肝素酶法合成方法

摘要

本发明公开的一种肝素酶法合成方法，包括以下步骤:原料清洗‑原料处理‑第一次酶解‑第二次酶解‑提取‑吸附‑洗脱‑沉淀‑干燥、酸化，通过合理调整制备方法，有效的提高了肝素钠的合成提取效率，进而肝素产量，减小了肝素钠活性损失，保证合成的肝素的品质和质量，而本发明的合成方法生产条件温和、环境友好、能耗低、效率高，降低肝素合成的成本。

主权项

一种肝素酶法合成方法，其特征在于，包含以下步骤：一、原料清洗：将猪肠用清水仔细清洗，去除内外污物和外部皮肤脂肪，得到洁净猪肠；二、原料处理：通过搅碎机将步骤一中得到的洁净猪肠绞碎成糜状，随后投入搅拌机中，进行搅拌，并同步加入水混合，搅拌时间控制在25~45分钟，最后继续搅拌，并缓慢加入防腐剂，混合均匀，得到酶解原料；三、第一次酶解：将步骤二中的酶解原料导入酶解罐中，并充分搅拌，同时加入新鲜胰浆作为酶解剂，并通过滴加NaOH溶液，调节酶解罐内料液的PH值，将PH值控制在7.3~8，在继续搅拌的同时，缓慢加热升温至40℃~42℃，直到搅拌均匀，随后酶解3~5小时，并保温，温度控制在40℃；四、第二次酶解：第一次酶解完成后，检测并通过滴加NaOH溶液，调节酶解罐内料液的PH值，将PH值控制在7.3~7.5，并加入按料液重量的0.5~1%的蛋白酶，充分搅拌的同时加热料液，温度控制在40℃~45℃，酶解4~4.2小时；五、提取：第二次酶解完成后，在40℃下恒温搅拌30分钟，随后急速升温至85℃~95℃，恒温10~15分钟，趁热捞除料液上层的杂质，最后用100目尼龙布精细过滤，得到酶解提取液。六、吸附；将步骤五中得到的酶解提取液冷却至室温，并去除酶解提取液表面的油脂后，放入吸附罐，控制升温至40℃~45℃，保持恒温，随后进行搅拌，并同时缓慢加入树脂，搅拌4~6小时，最后放出废液，收集吸附树脂；七、洗脱：先将吸附树脂用8倍于吸附树脂体积的清水充分漂洗，干净后，再用1~1.5倍于吸附树脂体积的氯化钠溶液对吸附树脂进行第一次洗脱操作，洗脱4小时；随后用0.5~0.7倍于吸附树脂体积的氯化钠溶液对吸附树脂进行第二次洗脱操作，洗脱2~2.5小时，最后滤干树脂，将第一次洗脱操作和第二次洗脱操作得到的洗脱液收集、合并；八、沉淀：将洗脱液过滤后倒入沉淀罐中，充分搅拌，在搅拌的同时逐步缓慢加入乙醇，并通过滴加0.4~0.7mol/L浓度的氢氧化钠溶液调节PH值至7.2~8.1，然后继续搅拌1~2小时，直至搅拌均匀，随后密封静置24‑26小时，待料液沉淀，最后回收上层清液，收集下层沉淀物；九、干燥、酸化：将上述的下层沉淀物脱水后，烘干，得到肝素钠，将肝素钠以强酸酸化，加入不良溶剂后，取沉淀，烘干得到肝素。