[发明专利]一种通过浸泡法诱导无籽刺梨四倍体产生的方法

摘要

本发明公开了一种通过浸泡法诱导无籽刺梨四倍体产生的方法，包括如下步骤：步骤一：材料准备,无菌苗茎段去除叶片和顶端，截成0.8‑3cm长，每段至少保留一个叶腋；步骤二：预培养：培养基MS+0.5mg/L 6‑BA中预培养，2‑3d；步骤三：避光震荡：将预处理后的材料，浸泡于含200‑500mg/L秋水仙素的无菌水中，于摇床上以120r/min，25‑30℃避光震荡，处理时间分别12‑72h；步骤四：光照培养：材料经浸泡处理后，转入未附加秋水仙素的MS+0.15mg/L NAA+0.5mg/L 6‑BA培养基中继续培养；步骤五：变异芽的同质化处理：上述培养40d后，选培养得到的变异明显的芽苗，在培养基MS+0.15mg/L NAA+0.5mg/L 6‑BA中，间隔40d反复培养5次。本发明的诱导方法,获得了四倍体无籽刺梨新种质，可增加无籽刺梨果实营养成分如Vc、VE和SOD等，同时使其果径和可食用部分增多。 1

主权项

1.一种通过浸泡法诱导无籽刺梨四倍体产生的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一：材料准备：无菌苗茎段去除叶片和顶端，截成0 .8‑3cm长，每段至少保留一个叶腋；

步骤二：预培养：培养基MS+0 .5mg/L 6‑BA中预培养，1d；

步骤三：避光震荡：将预处理后的材料，浸泡400mg/L秋水仙素的无菌水中，于摇床上以120r/min，25‑30℃避光震荡，处理时间分别为24h；

步骤四：光照培养：材料经浸泡处理后，转入未附加秋水仙素的MS+ 0.15mg/L NAA+ 0 .5mg/L 6‑BA培养基中继续培养；

步骤五：变异芽的同质化处理：经上述步骤四培养40d后，选培养得到的变异明显的芽苗，在培养基MS+ 0 .15mg/L NAA+ 0.5mg/L 6‑BA中，间隔40d反复培养5次；

其中避光震荡结束后，需将茎段在超净工作台上，用无菌过滤纸吸尽表面残留液体，再进行步骤四；

倍性鉴定：步骤五完成后，当同质化处理的芽长至2‑3cm时，将变异明显的无籽刺梨芽苗转入1/2MS +0 .1mg/L 6‑BA+0 .2mg/L IBA+0 .3g/L活性炭的培养基中生根；待根长1cm时， 截取根尖材料，利用常规制片法进行染色体计数，确定其倍性。

2.根据权利要求1所述的一种通过浸泡法使无籽刺梨四倍体产生的诱导方法，其特征在于，所述步骤一中材料准备 ,无菌苗茎段去除叶片和顶端，截成1cm长，每段至少保留一个叶腋。