[发明专利]纳豆芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌融合子的多重PCR鉴定方法有效
| 申请号： | 201610437232.2 | 申请日： | 2016-06-20 |
| 公开（公告）号： | CN105950756B | 公开（公告）日： | 2019-09-20 |
| 发明（设计）人： | 霍乃蕊;花锦;张琳;武朝霞;杨乔木 | 申请（专利权）人： | 山西农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 太原晋科知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 14110 | 代理人： | 王瑞玲 |
| 地址： | 030801 山西*** | 国省代码： | 山西;14 |
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| 摘要： | 本发明涉及生物检测技术领域，具体为一种纳豆芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌融合子的多重PCR鉴定方法，包括将纳豆芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌的原生质体进行融合，得到融合子，挑取菌落用于鉴定；制备模板，进行芽孢杆菌特异性引物设计和乳酸菌特异性引物设计，组成多重PCR引物；通过建立的多重PCR反应体系，对待测样品进行多重PCR扩增，最后对PCR产物使用凝胶电泳法进行检测、分析；多重PCR扩增的反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性30s，53℃退火30s，72℃延伸60s，共30个循环；产物末端72℃延伸 7min；多重PCR扩增的反应体系为：模板DNA 1ng/μL，每条引物0.4μM，dNTPs 0.25mM，Taq酶0.06U/μL。该方法简便，快速，特异性好，适用于芽孢杆菌、乳酸菌以及二者融合子的快速鉴定。 | ||
| 搜索关键词： | 豆芽 杆菌 酸乳 融合 多重 pcr 鉴定 方法 | ||
【主权项】：
1.一种纳豆芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌融合子的多重PCR鉴定方法，其特征是包括将纳豆芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌进行融合，得到融合子，挑取菌落用于鉴定；制备模板，进行芽孢杆菌特异性引物设计和乳酸菌特异性引物设计，组成多重PCR引物；通过建立的多重PCR反应体系，对待测样品进行多重PCR扩增，最后对PCR产物使用凝胶电泳法进行检测、分析；上述步骤中，所述纳豆芽孢杆菌引物的碱基序列为：上游引物 P1： 5’‑CATCATCGCAAAGCAGTA‑3’，如SEQ ID NO.1所示，下游引物P2：5’‑AAACAACGAGGAAATGGA‑3’，如SEQ ID NO.2所示，对应的扩增产物大小为308bp；所述嗜酸乳杆菌引物的碱基序列为：上游引物 P3：5’‑ACGAGGTGGGTTAGAATC‑3’，如SEQ ID NO.3所示，下游引物P4：5’‑TTGAGTGCCTTAGTTTGC‑3’，如SEQ ID NO.4所示，对应的扩增产物大小为576bp；多重PCR扩增的反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性30s，53℃退火30s，72℃延伸60s，共30个循环；产物末端72℃延伸 7min；所述多重PCR扩增的反应体系为：模板DNA 1ng/μL，每条引物0.4μM，dNTPs 0.25mM，Taq酶0.06U/μL。
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