[发明专利]用于检测微量组织中BRAF基因突变的引物组合及其应用有效
| 申请号： | 201610423410.6 | 申请日： | 2016-06-15 |
| 公开（公告）号： | CN105969877B | 公开（公告）日： | 2019-12-03 |
| 发明（设计）人： | 盛苗苗;罗瑛;唐文如;李珊珊;王芳;赵月光;张继虹;贾舒婷;吴晓明;刘静;周若宇;旦菊花 | 申请（专利权）人： | 昆明理工大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11 |
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| 地址： | 650093 云*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种用于检测微量组织中BRAF基因突变的引物组合，其包括预扩增引物组、用于检测11号外显子突变的引物组、用于检测15号外显子突变的引物组；该方法旨在将微量的DNA通过预扩增得到较高浓度的DNA模板，结合直接测序法检测样本中BRAF基因的突变情况；将该引物组合应用于制备检测BRAF基因突变的检测试剂中，可检测样本的DNA浓度低至100pg，且可以同时检测BRAF基因第11和15号外显子的所有突变，本发明提供的检测方法灵敏度高，特异性强，成本低，适用于临床肿瘤患者BRAF基因突变的检测，具有很好的临床应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 用于 检测 微量 组织 braf 基因突变 引物 组合 及其 应用 | ||
【主权项】：
1.用于检测微量组织中BRAF基因突变的引物组合，其特征在于：包括如SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:18所示的预扩增引物组、如SEQ ID NO:19- SEQ ID NO:20所示的用于检测11号外显子突变的引物组、如SEQ ID NO:21- SEQ ID NO:22所示的用于检测15号外显子突变的引物组；/n将如SEQ ID NO:1- SEQ ID NO:18所示的引物分别稀释后混匀制得Primer Mix，其中如SEQ ID NO:1- SEQ ID NO:16所示的引物的终浓度为0.05-0.1μM，如SEQ ID NO:17- SEQID NO:18所示的引物的终浓度为1-3μM；如SEQ ID NO:19- SEQ ID NO:22所示的引物稀释至5-10μM；/n在扩增管中加入1μL的10×反应缓冲液、2.5μL的Primer Mix、100-1000pg微量DNA模板、用去离子水补足至8.8μL；混匀，98℃预变性5-10min，然后置于冰上10-20min；再加入0.5μL dNTP 10mM each、0.2μL 100×BSA以及0.5μL phi29 DNA聚合酶，30-35℃扩增过夜，65℃加热10-20min使酶失活。/n
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