[发明专利]操作速度快的组化笔在细胞爬片免疫组化检测中应用

摘要

本发明公开了一种操作速度快的组化笔在细胞爬片免疫组化检测中应用，将细胞接种于载玻片式培养皿中进行细胞爬片，细胞培养结束后进行免疫细胞组织化学染色鉴定；所述载玻片式培养皿设有培养皿体和皿盖，培养皿体型号分单孔室和多孔室两种；各孔室面积大于载玻片，皿体底直接作为载玻片使用，皿体底外侧面设有与载玻片尺寸对应的长方形框痕线凹沟，在外力作用下可将皿体的底部沿长方形框痕线凹沟脱出。本发明适用于玻璃切片的各种免疫组织化学染色实验，可显著减少抗体和试剂用量，避免染色时液体流淌和扩散，提高操作速度。尤其可适用于细胞爬片或细胞涂片的实验研究中进行大规模，大样本多组别的的免疫组化染色。

主权项

1.一种操作速度快的组化笔在细胞爬片免疫组化检测中应用，其特征是：将细胞接种于载玻片式培养皿中进行细胞爬片，细胞培养结束后进行免疫细胞组织化学染色鉴定；所述载玻片式培养皿设有培养皿体和皿盖，培养皿体型号分单孔室和多孔室两种；各孔室面积大于载玻片，皿体底直接作为载玻片使用，皿体底外侧面设有与载玻片尺寸对应的长方形框痕线凹沟，在外力作用下可将皿体的底部沿长方形框痕线凹沟脱出，获得有培养细胞面形同载玻片的皿底，备用于各种免疫组织化学检测；所述免疫细胞组织化学染色鉴定依次包括下列步骤：（1）用冰丙酮固定 15 min或4%多聚甲醛固定；（2）流水漂洗，用PBS清洗 3次；（3）用 0.5%Triton X‑100孵育 10 min；（4）0．3%H2O2孵育10 min；（5）用PBS清洗标本 3次后，热风充分干燥 ；（7）用免疫组化笔将油墨在细胞爬片上画分2‑20个分隔染色区；（8）空气充分干燥；（9） 用正常二抗血清封闭孵育10 min；（10）在各细胞染色区分别滴加小鼠或兔抗第一抗体孵育30～60 min；（11） 吸除各细胞染色区液体并用PBS清洗3次；（12）滴加酶联小鼠或兔抗第二抗体工作液孵育30～60 min；（13）PBS清洗3次；（14）DAB显色，避光，镜下观察；（15）蒸馏水洗；（16）苏木素衬染 ；（17）盐酸酒精分化，自来水洗；（18）水性封固剂封片；所述油墨由下列组分混合组成：硬脂酸30~36%，苯15~20%，46℃石蜡9~15%，异丙醚7~11%，二硫化碳15~20%，氯仿15~20%；上述各组分用量之和为100%；所述免疫组化笔包括笔筒，笔筒内设置海绵样的圆柱体笔芯，笔筒内灌注有油墨，海绵样的圆柱体笔芯前端设置木质笔芯；海绵样的圆柱体笔芯放置在笔筒中，笔筒为长方体或圆柱体，笔筒口外侧有螺纹与内笔帽的内螺纹匹配吻合；笔筒中放置不锈钢珠一个，摇晃笔筒时作搅和油墨的作用；所述内笔帽起封闭笔筒口，防止油墨挥发保持其液相状态和联接外笔帽的作用，其内表面有与笔筒口吻合的内螺纹，可旋盖笔筒口，内笔帽的外表面设有与外笔帽内口缘匹配吻合的锁口凹，圆柱体笔芯末端一侧设有油墨刷；外笔帽的内口缘周设有锁口凹，与内笔帽外口缘匹配吻合，起封闭内笔帽和固定内笔帽为一体开启笔筒口，并起提出油墨刷的作用。