[发明专利]一种高效表达Fe3+依赖型食品级酸性脲酶的枯草芽孢杆菌

摘要

本发明公开了一种高效表达Fe³⁺依赖型食品级酸性脲酶的枯草芽孢杆菌，属于生物工程技术领域。Ni依赖性脲酶因Ni而存在安全隐患，为非食品酶，而Fe是人体含量的必需微量元素,对人体有益。本发明利用食品级枯草芽孢杆菌表达系统成功Bacillus substilis 168(pTTB)实现了Fe³⁺依赖型食品级酸性脲酶的食品级高效表达，Fe³⁺依赖型食品级酸性脲酶酶活达到5.8U/mL、以EC为底物时酶活达到了1.3U/mL，相对于原始菌株地衣芽孢杆菌，大大的提高了食品级脲酶的表达产量，为食品级酸性脲酶的工业化应用奠定了基础。

主权项

1.一种生产Fe³⁺依赖型食品级酸性脲酶的方法，其特征在于，所述方法是以表达Fe³⁺依赖型食品级酸性脲酶的枯草芽孢杆菌作为生产菌株，在利用生产菌株发酵生产酸性脲酶的过程中添加Fe³⁺；所述枯草芽孢杆菌表达的Fe³⁺依赖型食品级酸性脲酶的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述表达Fe³⁺依赖型食品级酸性脲酶的枯草芽孢杆菌的构建方法如下：1)从地衣芽孢杆菌基因组上克隆获得核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的Fe³⁺依赖型食品级酸性脲酶基因簇ureBL，将ureBL通过Kpn I及Xho I克隆到序列如SEQ ID NO.7所示的质粒pTTB，得到重组质粒pTTB‑ureBL；2)将构建的重组质粒pTTB‑ureBL转化于Bacillus subtilis 168构建产Fe³⁺依赖型食品级酸性脲酶的重组Bacillus subtilis168(pTTB‑ureBL)，Fe³⁺依赖型食品级酸性脲酶在重组Bacillus subtilis168(pTTB‑ureBL)中表达受P43组成型启动子调控；所述在利用生产菌株发酵生产酸性脲酶的过程中添加的Fe³⁺的浓度为2mmol/L。