[发明专利]一种检测免疫T细胞和B细胞中常见氨基酸的方法

摘要

一种检测免疫T细胞和B细胞中常见氨基酸的方法，其属于生物化学分析检测领域。该方法采用各取细胞样品至EP管中，加入内标溶液后，进行脱蛋白处理，得到含有氨基酸的上清液Ⅰ。将上清液Ⅰ按照Waters AccQ•Tag方法衍生化反应，得到衍生化产物Ⅱ，再利用LC/ESI‑Q‑TOF‑MS对衍生化产物Ⅱ进行分析和采集。该方法采用LC/ESI‑Q‑TOF‑MS对免疫细胞内常见氨基酸进行检测，操作简便、灵敏度和专属性高、结果准确，弥补了该领域的空白。

主权项

一种检测免疫T细胞和B细胞中常见氨基酸的方法，其特征在于步骤如下：（1）免疫T细胞和B细胞中氨基酸样品的制备取细胞样品至EP管中，加入内标溶液后，再加入乙腈、涡旋、离心进行沉淀蛋白处理，得到含有氨基酸的上清液Ⅰ；所述内标溶液为1mM L‑正缬氨酸溶液；（2）样品衍生化反应将上清液Ⅰ按照Waters AccQ•Tag方法衍生化反应，得到衍生化产物Ⅱ；（3）利用LC/ESI‑Q‑TOF‑MS对衍生化产物Ⅱ进行分析和采集液相分析条件为：柱温：50℃，进样室温度：10℃，流速：0.4mL/min，进样体积：5μL，流动相A:含20 mM/L甲酸铵、体积分数0.5%甲酸和体积分数1%乙腈的水，流动相B:含体积分数1.6%甲酸的乙腈，梯度洗脱；质谱条件分析条件为：离子源为ESI，检测器为四级杆串联飞行时间检测器。