[发明专利]一种细胞凋亡高质量小片段DNA的快速提取及评价方法有效
申请号: | 201610370483.3 | 申请日: | 2016-05-30 |
公开(公告)号: | CN105861492B | 公开(公告)日: | 2019-01-29 |
发明(设计)人: | 余国武;黄玉碧;张军杰;刘汉梅;胡育峰;刘应红;李炀平;吕亚楠;王德 | 申请(专利权)人: | 四川农业大学 |
主分类号: | C12Q1/6888 | 分类号: | C12Q1/6888 |
代理公司: | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人: | 裴娜 |
地址: | 611130 四*** | 国省代码: | 四川;51 |
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摘要: | 本发明公开了一种细胞凋亡高质量小片段DNA的快速提取及评价方法,包括用凋亡诱导物A进行凋亡诱导,进行验证细胞凋亡;凋亡诱导物A诱导大量细胞凋亡后进行等分;一份离心后收集细胞沉淀加细胞裂解液,充分裂解细胞,测定样品蛋白的浓度;经过100μg/ml蛋白酶K处理2小时,盐浓度为200mM,在锁相胶对水相和有机相隔离下,吸取锁相胶上方的水相,乙醇沉淀凋亡小片段凋亡DNA;相同体积TE溶解沉淀,根据蛋白的浓度标准化小片段DNA在TE溶解后上样体积从而确定上样的量,电泳后,根据凋亡小片段亮弱确定细胞凋亡的多少。本发明操作方便,有利于保护操作人员,小片段DNA提取条带亮、质量高,评价凋亡效果容易判断。 | ||
搜索关键词: | 一种 细胞 凋亡高 质量 片段 dna 快速 提取 评价 方法 | ||
【主权项】:
1.一种细胞凋亡高质量小片段DNA的快速提取及评价方法,其特征在于,所述细胞凋亡高质量小片段DNA的快速提取及评价方法包括:凋亡试剂A诱导细胞,收获细胞并进行等分;一份离心后收集细胞沉淀加细胞裂解液,充分裂解细胞,测定样品蛋白的浓度,根据等量总蛋白中内参基因的表达一致性作为参考来标准化小片段DNA;一份经过100μg/ml蛋白酶K处理2小时,盐浓度为200mM,在锁相胶对水相和有机相隔离下,吸取锁相胶上方的水相,乙醇沉淀凋亡小片段凋亡DNA;相同体积TE溶解沉淀,根据蛋白的浓度标准化小片段DNA在TE溶解后上样体积从而确定上样的量,电泳根据凋亡小片段亮弱确定细胞凋亡的多少。
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