[发明专利]一种荧光共振能量转移传感器的制备及对CaMV35S的快速检测方法

摘要

本发明提供了一种荧光共振能量转移传感器的制备及对CaMV35S快速检测的方法，包括如下步骤：步骤1、氮杂石墨烯量子点(NGQDs)溶液的制备；步骤2、银纳米粒子(AgNPs)分散液的制备；步骤3、氮杂石墨烯量子点‑探针1(NGQDs‑probe1)分散液的制备；步骤4、银纳米粒子‑探针2(AgNPs‑probe2)分散液的制备；步骤5、荧光共振能量转移传感器的构建；步骤6、对CaMV35S目标DNA进行检测，建立标准曲线。该传感器的制备是基于DNA互补配对杂交特异性作用所构建的，因而相对于免疫反应而言有与目标分子结合力强、特异性高、长时间暴露不容易变性、对周围环境要求低等特点。

主权项

1.一种荧光共振能量转移传感器对CaMV35S的快速检测方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1、氮杂石墨烯量子点溶液的制备步骤2、银纳米粒子分散液的制备步骤3、氮杂石墨烯量子点‑探针1分散液的制备取步骤1制备的氮杂石墨烯量子点溶液超声分散，加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐溶液，振荡均匀，加入N‑羟基琥珀酰亚胺溶液，振荡均匀，加入探针1储备液；在室温下反应，得到氮杂石墨烯量子点‑探针1，记作NGQDs‑probe1，之后用乙醇洗涤，离心，最后将NGQDs‑probe1分散于Tris‑HCl缓冲液中，得到NGQDs‑probe1分散液，备用；步骤4、银纳米粒子‑探针2分散液的制备将探针2储备液加入到步骤2得到的银纳米粒子分散液中室温孵育，振荡反应，然后加入Tris‑HCl缓冲液，再加入NaCl溶液调节钠离子浓度，振荡反应；反应结束后，水洗、离心，得到银纳米粒子‑探针2，记作AgNPs‑probe2，将全部产物Ag‑probe2分散在Tris‑HCl缓冲液中得到Ag‑probe2分散液，备用；步骤5、荧光共振能量转移传感器的构建将CaMV35S目标DNA储备液加入到步骤3制备的NGQDs‑probe1溶液中，恒温振荡孵育，再加入步骤4制备的Ag‑probe2分散液，加入NaCl溶液调节钠离子浓度，之后持续孵育，最后形成NGQDs‑probe1/tDNA/Ag‑probe2的三明治夹心结构，得到荧光共振能量转移传感器；步骤6、对CaMV35S目标DNA进行检测，建立标准曲线将CaMV35S目标DNA溶液加入到制备好的NGQDs‑probe1分散液中，恒温振荡孵育，再加入制备好的Ag‑probe2分散液，加入NaCl溶液调节钠离子浓度，之后持续孵育，从而形成NGQDs‑probe1/tDNA/Ag‑probe2的三明治夹心结构，采用荧光分光光度计在355nm下测量溶液的荧光强度，并建立荧光淬灭效率与tDNA的标准曲线；所用的探针1：GAT GCC TCT GCC‑NH2，探针2：HS‑G GCC ATC GTT GAA，CaMV35S目标DNA：GGC AGA GGC ATC TTC AAC GAT GGC C。