[发明专利]一种实验用紫贻贝活体性别鉴定及生长恢复方法

摘要

本发明涉及一种实验用紫贻贝活体性别鉴定及生长恢复方法，该方法能够实验前期对紫贻贝的性别进行区分，为毒理学实验设计的精确化精细化提供保障，同时还能保证实验的长期可持续性及操作性。本发明可应用于在实验前确定紫贻贝性别的鉴定，有益于更加精确的对实验进行设计和操作，同时这种方法实现了在性别鉴定的前提下，使生物样本处于存活条件，可以降低实验处理样本总数，同时能够为多种后续的实验提供了良好的可操作空间及可能性。同时，该方法在贝类遗传、育种实验及精子库建立等有应用的潜力。

主权项

1.一种实验用紫贻贝活体性别鉴定及生长恢复方法，其特征在于，具体步骤如下：1)采集紫贻贝，用海水进行冲洗，洗净表面泥沙，对于成团的贻贝，选取其足丝聚集的区域，利用手术剪刀，剪断足丝，进行个体分离；2)分离后的个体，用70％的酒精擦拭表面灭菌；3)将紫贻贝固定于固定装置上，进行生殖细胞的采集；具体采集方法如下：利用微型电钻，在紫贻贝排泄空腔处进行打孔；之后用将注射器的针头从钻孔处深入，对性腺细胞进行抽取；4)鉴别：抽取物在400倍显微镜下观察，如果具有鞭毛型精子，则为雄性；如果具有圆形黄卵，则为雌性；5)鉴别完性别后的紫贻贝根据性别放置在不同的养殖箱内，养殖箱采用透明材质；投放密度大于250ml海水/贝；养殖箱内海水先经过0.45μm的滤膜抽滤，后经高压灭菌121℃，20min，灭菌后，冷却使用；6)饲养条件：水温18±2℃，盐度在30±3psu，pH为8.1±0.1，该过程中，使用循环泵对养殖水体进行循环水处理，同时进行曝气；7)饵料投喂：每天200ml藻液/贝喂养，藻液浓度3*10⁴个/ml，在换水前5小时投喂，海水每天更换一次；步骤3)中的固定装置包括固定板(1)、固定架(2)、活动架(3)、弹簧(4)和槽架(8)；所述槽架(8)固定于所述固定板(1)两侧；所述固定架(2)穿过槽架(8)；所述活动架(3)穿过槽架(8)；所述固定架(2)与所述活动架(3)通过弹簧(4)连接。