[发明专利]基于铁蛋白纳米结构的新型HER2靶向治疗性抗体的制备方法及应用在审
| 申请号： | 201610357546.1 | 申请日： | 2016-05-27 |
| 公开（公告）号： | CN105950665A | 公开（公告）日： | 2016-09-21 |
| 发明（设计）人： | 刘庆友;李力;石德顺;张海航;李志鹏;陈忠毅;温凯婷 | 申请（专利权）人： | 刘庆友;李力;石德顺;陈忠毅;张海航;李志鹏;温凯婷 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N15/13;C12N5/10;C07K16/32;A61K39/395;A61P35/00 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 537000 广西*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种基于铁蛋白纳米结构的新型HER2靶向治疗性抗体的制备方法，构建鸡卵清白蛋白OVA启动子纳米铁蛋白笼Ferritin的慢病毒表达载体，并通过脂质体转染在293T细胞内进行包装产毒，将病毒液进行浓缩及滴度测定；然后将病毒液于新鲜受精胚进行胚盘下腔注射，继续孵化至出壳；待鸡性成熟，对精浆及未受精蛋的胚珠进行基因组PCR鉴定，筛出阳性鸡；以G0代阳性鸡与阴性异性鸡进行交配，对G1代鸡组织，精浆及未受精蛋的胚珠进行基因组PCR鉴定，待性成熟，筛出阳性鸡，再与阴性异性鸡进行交配，同样方法筛出G2代阳性鸡，并对各代阳性母鸡的蛋清进行Western Blot及ELISA鉴定；即可得到能稳定遗传并在蛋清中稳定表达治疗恶性肿瘤的纳米铁蛋白与单克隆抗体融合蛋白的新品种鸡。具有制得的蛋白载量大，可以口服的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 铁蛋白 纳米 结构 新型 her2 靶向 治疗 抗体 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种基于铁蛋白纳米结构的新型HER2靶向治疗性抗体的制备方法，其特征在于依次包括如下步骤：1)、构建鸡卵清白蛋白OVA启动子纳米铁蛋白笼Ferritin的慢病毒表达载体，并通过脂质体转染在293T细胞内进行包装产毒，将病毒液进行浓缩及滴度测定；2)、然后将病毒液于新鲜受精胚进行胚盘下腔注射，继续孵化至出壳；待鸡性成熟，对精浆及未受精蛋的胚珠进行基因组PCR鉴定，筛出阳性鸡；或然后将病毒液对育雏期末或育成期的公鸡进行病毒睾丸注射，公鸡饲养一个月后，取鸡精在荧光显微镜下进行观察，如果发现带有荧光的精子，用这种精子进行人工受精，生出的蛋进行孵化，孵出的小鸡部分带有靶向治疗性抗体的转基因阳性鸡；3)、以G0代阳性鸡与阴性异性鸡进行交配，对G1代鸡组织，精浆及未受精蛋的胚珠进行基因组PCR鉴定，待性成熟，筛出阳性鸡，再与阴性异性鸡进行交配，同样方法筛出G2代阳性鸡，并对各代阳性母鸡的蛋清进行Western Blot及ELISA鉴定；即可得到能稳定遗传并在蛋清中稳定表达治疗恶性肿瘤的纳米铁蛋白与单克隆抗体融合蛋白的新品种鸡。
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