[发明专利]一种泡叶藻寡糖的制备方法及其在降血糖药物中的应用

摘要

本发明提供了一种泡叶藻寡糖的制备方法及其在降血糖药物中的应用。该工艺流程特征在于以脱脂、除蛋白及色素的泡叶藻岩藻多糖为原料，联合微波辅助处理，添加果胶酶、纤维素酶、岩藻多糖酶和硫酸酯酶以酶解岩藻多糖，经乙醇沉降去除未充分降解岩藻多糖及酶蛋白，离心上清液经蒸馏浓缩与提取多糖过程中产生的寡糖合并后过分子筛，截留物冷冻干燥制备得到泡叶藻寡糖，过程中所用乙醇回收循环利用。经体外及细胞试验，本发明中制备的泡叶藻活性寡糖对糖代谢具有显著的改善作用。本发明提供了一套绿色高效、环境友好的利用微波辅助酶解制备泡叶藻活性寡糖的工艺方法。

主权项

1.一种泡叶藻寡糖的制备方法，其特征在于，具体步骤如下： （1）泡叶藻干燥粉碎后，向泡叶藻干粉中加入体积浓度95%乙醇回流提取1‑2h，泡叶藻干粉与乙醇溶液重量比为1:15‑20，回流提取结束后回收乙醇备用，烘干得到干燥脱脂的泡叶藻粉末；（2）向步骤（1）得到的泡叶藻粉末中加入蒸馏水，其中泡叶藻粉末与蒸馏水重量比为1:25‑30，浸泡0.5‑1 h，500‑800 W微波辐照1‑2 min，冷却后，重复辐照2‑3次，提取结束后，进行过滤，将滤渣重复上述步骤进行2‑3次提取，将获得的滤液混合后浓缩至原体积的1/4‑1/3，加入3‑4倍体积的步骤（1）所回收乙醇，4‑10℃静置沉淀8‑10 h，3000 rpm离心15‑20 min收集沉淀物，沉淀物真空冷冻干燥后粉碎，得到泡叶藻粗岩藻多糖粉末；离心后上清液经旋转蒸发回收乙醇，上清浓缩后保存备用；（3）向步骤（2）所得泡叶藻粗岩藻多糖粉末中加入蒸馏水，其中泡叶藻粗岩藻多糖粉末与蒸馏水重量比为1:10‑20，进行搅拌复溶，用Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法中一种或几种除蛋白5‑8次得多糖提取液；（4）AB‑8树脂经活化后湿法装入1.6×60 cm层析柱中，蒸馏水平衡，以1.0 mL/min的流速连续通过步骤（3）多糖提取液，分管收集，重复处理3‑5次后得多糖精提液；（5）步骤（4）的多糖精提液经截留分子量8000‑14000规格透析袋透析得截留液，截留液在50‑60℃及转速为20‑40 r/min条件下旋转蒸发，浓缩至膏状并真空冷冻干燥，得到泡叶藻精岩藻多糖粉末；（6）将步骤（5）中所得泡叶藻精岩藻多糖粉末用蒸馏水溶解，质量浓度为4‑10%，利用500‑800 W微波辐照2‑3 min，冷却后，重复辐照1‑2次；调节pH为6.5‑7.8，加入硫酸酯酶后置于32‑40℃，速度为65‑90 r/min水浴摇床中酶解0.5‑1.0 h后取出，沸水加热5‑10 min以灭酶活，冷却至室温，3000 rpm离心5‑10 min取上清液；（7）将步骤（6）离心所得上清液调节pH为5.5‑6.0，加入岩藻多糖酶后置于35‑50℃，速度为65‑90 r/min水浴摇床中酶解1‑1.2 h后取出，沸水加热5‑10 min以灭酶活，冷却至室温，3000 rpm离心5‑10min取上清液；（8）将步骤（7）离心所得上清液调节pH为4.5‑5.0，加入纤维素酶后置于50‑60℃，速度为65‑90 r/min水浴摇床中酶解0.5‑1.0 h后取出，沸水加热10‑15 min以灭酶活，冷却至室温，3000 rpm离心5‑10 min取上清液；（9）将步骤（8）离心所得上清液调节pH为3.0‑4.5，加入果胶酶后置于45‑50℃，速度为65‑90 r/min水浴摇床中酶解10‑20 min后取出，沸水加热10‑15 min以灭酶活，冷却至室温，3000 rpm离心5‑10 min取上清液备用；（10）向步骤（9）中上清液加入等体积的浓度95%乙醇沉降去除蛋白，4‑8℃静置沉淀0.5‑2.0 h后，离心收集上清并在50‑60℃及转速为20‑40 r/min条件下旋转蒸发除去乙醇；（11）向步骤（10）除乙醇后的上清液中加入体积比1:3‑4的体积浓度95%乙醇沉降除去未充分降解岩藻多糖，4‑10℃静置沉淀4‑6h后，离心收集上清并在50‑60℃及转速为20‑40 r/min条件下旋转蒸发回收乙醇，即得泡叶藻寡糖粗品溶液；（12）将步骤（2）中上清浓缩液和步骤（11）中泡叶藻寡糖粗品溶液混合，通过3000D超滤膜，滤出液再通过500 D的分子筛，将截留物进行冷冻干燥，制备得泡叶藻寡糖。