[发明专利]一种原代小鼠或大鼠神经元的分离培养方法

摘要

本发明公开了一种原代小鼠或大鼠神经元细胞的分离培养方法，开创性的采用了活检针采取处理后的组织，使得采样直接针对目的细胞，不但直接有效，同时巧妙地避免了表面包膜细胞以及细菌的混入，降低了细胞、细菌污染的同时，大大提高了目的细胞的纯度。同时，本发明的原代小鼠或大鼠神经元细胞的分离培养方法，使用特殊制备的复合酶消化液，相比传统单一的胶原酶预热消化，不但避免了对组织过度消化过度吹打所导致的细胞活性低、得率差的问题，而且消化的更均匀透彻。采用预贴壁以及原代培养早期加入Laminin的方式，可以极大地促进神经元的贴壁、神经突触的生长以及神经网络的形成，从而进一步提高神经元的得率及长期存活率。

主权项

一种原代小鼠或大鼠神经元细胞的分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：小鼠或大鼠大脑组织的预处理将小鼠或者大鼠离体的大脑组织用PBS溶液洗涤后，放置在冰上待用；步骤2：取神经元细胞使用活检针刺入步骤1处理后的大脑组织，切取神经元细胞；步骤3：酶消化将步骤2获得的神经元细胞置于复合酶消化液中消化，其中复合酶消化液中包括质量比为1:1:1:1的I型胶原酶、II型胶原酶、IV型胶原酶和Dispase酶；步骤4：分离培养神经元细胞将步骤3消化完毕的骨骼肌细胞过70um筛网，进行离心洗涤，然后进行重悬并再次离心，最后再次用预贴壁培养基重悬，然后预贴壁4h后更换至神经元培养基，细胞放置于37℃，5％CO₂的培养箱中进行培养。