[发明专利]适于家蚕丝腺表达的改造人血清白蛋白基因及其表达系统和应用

摘要

本发明公开了适于家蚕丝腺表达的改造人血清白蛋白基因及其表达系统和应用，改造人血清白蛋白基因如SEQ ID NO.1第7‑1767位所示，其编码的氨基酸如SEQ ID NO.2所示，将改造人血清白蛋白基因与分泌型丝胶1基因启动子和分泌型丝胶1基因终止子构成表达框，并用增强子Hr3增强表达，同时连入piggyBac转座臂和荧光筛选标记基因构建表达系统，该表达系统能够在家蚕丝腺中高效表达重组人血清白蛋白，并且具有生物活性，能够用于大规模生产重组人血清白蛋白，具有良好的市场前景。

主权项

1.在家蚕中部丝腺表达重组人血清白蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：将所述表达系统转化解除滞育家蚕蚕卵，用无毒胶水封口后经甲醛蒸汽消毒，孵化，筛选转基因阳性蛾圈，取阳性转基因家蚕茧壳，在液氮中粉碎成粉末，然后溶解于含20mM Tris-Cl、8MUrea、pH 7.9的缓冲液中，离心收集上清，经纯化，得重组人血清白蛋白；所述纯化的具体方法为：将上清液过Capto MMC亲和层析柱，用含25mM 磷酸盐缓冲液、100mM NaCl、pH 6.5的漂洗液洗脱除杂，再用含25mM磷酸盐缓冲液、100mM NaCl、pH 7.0-7.5的洗脱液洗脱，收集洗脱液，将洗脱液浓缩，超滤除盐；然后再过HiTrap Q柱纯化，用含25mM磷酸盐缓冲液、150mM NaCl、pH 8.0的漂洗液洗脱除杂，接着用含25mM磷酸盐缓冲液、200mM NaCl、pH 8.0的洗脱液洗脱，收集洗脱液并将洗脱液浓缩，加入固体硫酸铵至终浓度为2M，然后过HiTrap Phenyl FF柱，经过含25mM磷酸盐缓冲液、1M (NH4)2SO4、pH 8.0的漂洗液除杂后，再用含25mM磷酸盐缓冲液、1.6M (NH4)2SO4、pH 8.0的洗脱液洗脱，收集的洗脱液即为纯化后的重组人血清白蛋白；所述表达系统含有顺序连接的增强子hr3，分泌型丝胶1基因启动子、改造的人血清白蛋白基因和丝胶1基因的终止子；还含有荧光筛选标记基因表达框和piggyBac转座臂序列；所述表达系统的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述改造的人血清白蛋白基因如SEQ ID NO.1第7-1767位所示。