[发明专利]一种凤丫蕨的快速繁殖和离体保存方法

摘要

本发明提供植物凤丫蕨(Coniogramme japonica(Thunberg)Diels)的快速繁殖和离体保存方法。包括外植体的获取、绿色球状体GGB诱导与增殖培养、生根培养、分化培养、离体保存或移栽步骤，取野外自然生长的凤丫蕨孢子，在孢子萌发培养基中培养，获得带根状茎的小苗，转入绿色球状体诱导与增殖培养基中培养，将生成的绿色球状体转入生根培养基中，然后将长出1‑2条根、分化出小叶但仍未完全分化的绿色球状体转接至分化培养基中进行培养，分化出的小苗转接在离体培养基上继代培养离体保存，或将分化出的小苗进行移栽。该方法对凤丫蕨属植物种质资源的开发、利用和保护提供了重要的技术支撑。

主权项

一种凤丫蕨的快速繁殖和离体保存方法，该方法包括外植体的获取、绿色球状体GGB诱导与增殖培养、生根培养、分化培养、离体保存或移栽步骤，取野外自然生长的凤丫蕨孢子，在孢子萌发培养基(1)中培养，获得带根状茎的小苗，转入绿色球状体诱导与增殖培养基(2)中培养，将生成的绿色球状体转入生根培养基(3)中，然后将长出1‑2条根、分化出小叶但仍未完全分化的绿色球状体转接至分化培养基(4)中进行培养，分化出的小苗转接在离体培养基(5)上继代培养离体保存，或将分化出的小苗进行移栽，所述的(1)孢子萌发培养基为：基本培养基为MS大量元素取1/4，其余成分与MS相同的1/4MS培养基；(2)GGB诱导与增殖培养基为：MS+6‑BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L；(3)生根培养基为：1/10MS；(4)分化培养基为：1/2MS+IBA0.1mg/L+IAA0.1mg/L；(5)离体保存培养基为：1/2MS，以上培养基均添加蔗糖30g/L，琼脂5.8g/L固化，pH5.8，(1)(2)(3)(5)在如下培养条件下培养：培养温度23±2℃，光照强度10‑20μmol/(m²·s)，光照12h/d；(4)的培养条件为：培养温度28℃，光照强度50μmol/(m²·s)，光照12h/d。