[发明专利]一种评价Bt毒蛋白对鳞翅目幼虫毒力的测定方法

摘要

一种评价Bt毒蛋白对鳞翅目幼虫毒力的测定方法，包括以下步骤：(1)人工饲料预处理；(2)饲料表面的Bt毒蛋白涂染和毒力的测定；(3)试验统计。本发明Bt蛋白毒力测定方法采用挤瓶饲料倒入到24孔培养板中，速度快、效率高，能够形成均一的表面积，加入Bt蛋白后，能形成均匀稳定的表面浓度，不仅可以准确的测定Bt蛋白毒力，还能节约蛋白，达到测试成本较低的效果。

主权项

一种评价Bt毒蛋白对鳞翅目幼虫毒力的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)人工饲料预处理：将人工饲料在40～50℃未凝固时，倒入塑料挤瓶，然后挤入到24孔板里面，其中每个小孔挤入1.5～2ml，孔的直径为1.6cm，凝固后，饲料形成表面积为2cm²，备用；(2)饲料表面的Bt毒蛋白涂染和毒力的测定：将待测的Bt毒蛋白用缓冲液进行系列稀释成6～10个浓度，用移液枪吸取每个浓度的蛋白液体40～45μl到小孔里，摇匀，正好全部覆盖饲料表面，待涂染Bt毒蛋白液体蒸发后，接入鳞翅目初孵幼虫，每孔1头，盖上盖子，扎紧，放在温度为25～27℃、相对湿度为75～85％、光照L/D＝16h/8h的条件下，以添加40～45μl的缓冲液的为对照，重复3～4次，7d后观察试验组和对照组试虫死亡情况，并称取存活幼虫体重；(3)试验统计：拟合Bt毒蛋白对幼虫的毒力曲线和生长发育抑制曲线，计算出LC₅₀值和6IC₅₀值及95％置信限，采用LC₅₀值的95％置信限或6IC₅₀值的95％置信限为衡量参数检验Bt毒蛋白对不同种类害虫的毒力是否显著，如不重叠，则表明毒力间有差异。