[发明专利]一种用于伪结核杆菌的无血清培养基制备方法

摘要

本发明一种用于伪结核杆菌的无血清培养基制备方法，属于微生物技术领域；其制备方法包括基础母液培养液的制备、微量元素溶液的制备、维生素及氨基酸溶液的制备、液体伪结核杆菌的无血清培养基的配制和固体伪结核杆菌的无血清培养基的配制；本培养基成份明确，含有伪结核杆菌生长所需的全部营养物质，伪结核杆菌在该培养基上可以完全自主生长繁殖，不含有动物血清成份，摆脱了伪结核杆菌体外培养依赖动物血清的技术问题，屏蔽了伪结核杆菌培养过程中由动物血清污染牲病毒的可能，在满足微生物生长的同时，避免了动物血清作为伪结核杆菌培养基成分，对疫苗制品引入传染性疾病的风险。

主权项

1.一种用于伪结核杆菌的无血清液体培养基制备方法，其特征在于，所述制备方法包括基础母液培养液的制备、微量元素溶液的制备、维生素及氨基酸溶液的制备、伪结核杆菌的无血清液体培养基的配制，具体步骤如下：a、基础母液培养液的制备，在1000mL水溶液中溶解下述成份KH₂PO₄            0.3gNa₂HPO₄∙12H₂O     1.4g胰蛋白胨         5.0g酵母提取物       2.5gNaCl             5.0g将上述溶液在121℃条件下湿热灭菌20分钟，放置至常温备用；b、微量元素溶液的制备，在1000mL水溶液中配制下述微量元素成份FeSO₄∙7H₂O       0.1gMnCl₂∙4H₂O       0.1gZnSO₄∙7H₂O       0.1gCoSO₄∙7H₂O       0.1g配制完成后，通过0.22微米滤膜过滤后备用；c、维生素及氨基酸溶液的制备，在100mL水溶液中溶解下述成份谷氨酰胺          3.0g天冬酰胺          3.0g维生素B1          0.25g维生素H           0.25g配制完成后，通过0.22微米滤膜过滤后放置于‑20℃备用；d、伪结核杆菌的无血清液体培养基的配制方法为每1000mL步骤a中所述配制完成的基础母液培养液在无菌条件下加入0.5‑5mL的步骤b配制的微量元素溶液，加入0.5‑2mL步骤c中配制的维生素及氨基酸溶液。