[发明专利]长春花嫁接小蔓长春花所得嵌合体细胞培养体系建立方法

摘要

本发明公开了长春花嫁接小蔓长春花所得嵌合体细胞培养体系的建立方法，其以小蔓长春花过根部切割后保留2—3片叶子为砧木，在无菌条件下将长春花生长点接种于小蔓长春花砧木上，接穗和砧木结合的地方会出现一团愈伤组织，将该愈伤组织进行液体悬浮培养，筛选优良细胞系。本发明将长春花的生长点嫁接到小蔓长春花上后，以所得嵌合体为材料诱导愈伤组织，最后建立起该嵌合体的离体细胞悬浮培养体系，测试结果表明，来源于嵌合体的细胞其抗癌物质（长春碱、长春新碱、文多灵等）均有提高。

主权项

长春花嫁接小蔓长春花所得嵌合体细胞培养体系建立方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一，将小蔓长春花试管苗在过根部切割，保留2—3片叶子做为砧木；步骤二，在检剖显微镜下剥离长春花无菌苗带两个叶缘基的生长点；步骤三，在无菌条件下将长春花生长点接种于小蔓长春花砧木上；步骤四，将步骤三中得到的嫁接材料接种到生长培养基中，并于25℃下培养3‑4周，所述生长培养基为，MS+6‑BA 2.0‑3.0 mg/L+NAA0.1‑0.5 mg/L+GA3 0.5‑1.0 mg/L的固体培养基；步骤五，待接穗和砧木结合的地方出现一团愈伤组织，将该愈伤组织进行液体悬浮培养，液体悬浮培养所用培养基为：MS+6‑BA 0.2‑0.5 mg/L+NAA1.0‑2.0 mg/L+水解酪蛋白15‑20 mg/L的液体培养基；筛选优良细胞系。