[发明专利]一种重组酵母菌株及其构建方法和应用

摘要

本发明涉及基因工程技术领域，公开了一种重组酵母菌株及其构建方法和应用。所述重组酵母菌株包含经酵母同源重组整合到基因组上的2个特定基因片段。本发明通过选择特定的组成型启动子组合，搭配红发夫酵母来源的八氢番茄红素合成酶和番茄红素环化酶双功能酶基因CrtYB、GGPP合酶CrtE、八氢番茄红素去饱和酶CrtI，以及特定的酵母内源基因等，经模块化设计整合至酵母菌株基因组上并同源重组敲除ypl062w基因，获得一株全新的无需诱导剂的重组菌株并保证了β‑胡萝卜素的高产。

主权项

1.一种重组酿酒酵母菌株，其特征在于，所述酿酒酵母基因组包含经酵母自身同源重组整合到其基因组上的如下基因片段：酵母Delta位点上游同源序列Delta1、带有可弹框的URA3标签、启动子TEF1p、Xd CrtE、终止子PDX1t、启动子TDH3p、Xd CrtI、终止子MPE1t、启动子FBA1p、Xd CrtYB、终止子TDH2t、Delta位点下游同源序列Delta2顺次拼接而成的基因片段1；酵母ypl062w基因上游同源序列、His3标签、终止子PGK1t、启动子TDH3p、融合基因BTS1‑ERG20、终止子PGI1t、启动子TEF1p、截短的HMG‑CoA还原酶基因tHMGR1、终止子TEF2t、酵母ypl062w基因下游同源序列顺次拼接而成的基因片段2；所述截短的HMG‑CoA还原酶基因tHMGR1如SEQ ID NO:2中的5106‑6683bp所示。