[发明专利]肺炎支原体抗体免疫胶体金检测试纸条及其制备方法

摘要

本发明公开了一种肺炎支原体抗体免疫胶体金检测试纸条及其制备方法，是将肺炎支原体抗原及胶体金标记肺炎支原体抗原，分别固定在硝酸纤维素膜和玻璃纤维素膜上，组成肺炎支原体抗体双抗原夹心法免疫胶体金检测试纸条。试纸条由样品垫、包被有胶体金标记肺炎支原体抗原胶体金垫、包被肺炎支原体抗原硝酸纤维素膜及PVC底板4个部分组成，样品垫用玻璃纤维素膜。在PVC底板中央贴上包被好的硝酸纤维素膜，以纯化肺炎支原体抗原在硝酸纤维素膜上划线作为测试线，以抗肺炎支原体单克隆抗体在硝酸纤维素膜上划线作为控制线。检测时取抗凝血或血清1滴，滴加在样品垫上，根据测试线和控制线是否出现色带来判断血清中是否存在肺炎支原体抗体。本发明建立了敏感快速的检测血清中肺炎支原体抗体的方法，主要供肺炎支原体流行病学调查使用。

主权项

肺炎支原体抗体免疫胶体金检测试纸条的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)包被有肺炎支原体抗原的胶体金垫的制备：采用柠檬酸三钠还原法，制备30nm的胶体金。用0.2mol/L K₂CO₃将胶体金溶液调到pH8.0。然后将溶液置于磁力搅拌器上缓慢搅拌，按每100ml溶液加入lmg肺炎支原体抗原将蛋白缓慢滴加到胶体金溶液中，继续搅拌2h，再滴加入到终浓度为0.1％的PEG3000、1％蔗糖和1％的酪蛋白进行封闭60min，标记结束后以12000r/m离心，弃上清，沉淀物用0.01mol/L PBS溶液重悬，将沉淀重悬为原体积的1/10，再经2000r/min离心20min，取上清加至葡聚糖凝胶层析柱纯化，最终纯度达95％以上。然后将标记胶体金溶液加样于玻璃纤维素膜上，在温度20℃～25℃干燥4h，制成胶体金垫，干燥备用。(2)肺炎支原体抗原包被硝酸纤维素膜：用生理盐水将肺炎支原体抗原稀释成lmg/ml，然后用喷膜仪将肺炎支原体抗原在硝酸纤维素膜上按1.2μl/cm进行划线包被，同时在硝酸纤维素膜上按1.2μl/cm包被鼠抗肺炎支原体单克隆抗体，用于产品的质控线，包被完成后将硝酸纤维素膜在干燥间室温干燥8h，备用。(3)试纸条的组装：在干燥间内准备好吸水滤纸、样品垫、PVC底板，在PVC底板中央贴上包被好的肺炎支原体抗原硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上缘粘贴吸水滤纸，硝酸纤维素膜下缘粘贴包被肺炎支原体抗原胶体金垫，胶体金垫下缘粘贴样品垫，完成后用裁切机将贴好的试纸板切成5mm宽的试纸条。再将试纸条密封于铝箔袋中，完成产品的组装。