[发明专利]制备猪圆环病毒灭活疫苗的方法在审
| 申请号： | 201610145865.6 | 申请日： | 2016-03-15 |
| 公开（公告）号： | CN105797150A | 公开（公告）日： | 2016-07-27 |
| 发明（设计）人： | 严伟东;何启盖;陈芳洲;李梦莹;叶十一;李中华;郭效珍;陈焕春 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | A61K39/12 | 分类号： | A61K39/12;A61P31/20;C12N7/00 |
| 代理公司： | 武汉开元知识产权代理有限公司 42104 | 代理人： | 樊戎;冯超 |
| 地址： | 430070 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种制备猪圆环病毒灭活疫苗的方法，该方法将PK15、ST或BHK‑21分别经EDTA‑胰酶消化后传代，用细胞生长液继续培养，细胞长满85％～100％时，用细胞维持液细胞数量；将猪圆环病毒2b型毒株接种长满85％～100％细胞的介质上，培养收集毒株；将毒株收毒接种长满85％～95％细胞的介质上，培养收集得到猪圆环病毒2b型毒株抗原液；灭活再加入免疫佐剂，经乳化制备得到灭活疫苗。本发明的方法制备得到的疫苗的抗原稳定性强、免疫原性高、抗原回收率高和疫苗安全性强。本发明的灭活方法与甲醛灭活的方法进行对比，两种灭活方法制备得到灭活疫苗免疫猪后，血清抗体效价较高，其中用0.002mol/L BEI灭活48h的方法得到的灭活疫苗的抗原稳定性、免疫原性、抗原回收率和疫苗安全性最好。 | ||
| 搜索关键词： | 制备 圆环 病毒 疫苗 方法 | ||
【主权项】：
一种制备猪圆环病毒灭活疫苗的方法，其特征在于：包括以下步骤：1)将PK15、ST或BHK‑21分别经EDTA‑胰酶消化后传代，用细胞生长液继续培养，细胞长满85％～100％时，用细胞维持液细胞数量；2)将猪圆环病毒2b型毒株接种长满85％～100％细胞的介质上，用细胞维持液培养12～36h，再用200～400mmol/L的D‑氨基葡萄糖在温度为37℃条件下培养20～40min，最后用细胞维持液培养36～48h，收集毒株；3)将步骤2)收集的毒株收毒接种长满85％～95％细胞的介质上，用细胞维持液培养12～36h，收集得到猪圆环病毒2b型毒株抗原液；4)用浓度为0.00025～0.002mol/L的BEI对的猪圆环病毒2b型毒株抗原液灭活24～48h，加入阻断剂终止灭活，再加入免疫佐剂，经乳化制备得到灭活疫苗。
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