[发明专利]一种抗安卡拉病毒鸡卵黄抗体的制备方法

摘要

本发明涉及一种抗安卡拉病毒鸡卵黄抗体的制备方法，首先制备安卡拉免疫抗原，用安卡拉免疫抗原对健康蛋鸡进行免疫，获得合格的鸡蛋，采取蛋黄，用醋酸-醋酸钠缓冲液进行稀释，取上清液，加入饱和硫酸铵溶液，离心、沉淀、过滤后，加入灭菌生理盐水，然后进行超滤，加入质量体积比为1：130~180的β-环糊精、1：150~230的谷氨酸钠、1：5~20的脱脂奶粉、1：10~30的可溶性淀粉混合均匀后进行干燥，最终制得卵黄抗体干粉制剂，本发明过滤时间短，蛋白不易变性，不易损失蛋白，所得的卵黄抗体对安卡拉病的治疗效果显著，见效时间快，使用效果好，病鸡死亡率低。

主权项

一种抗安卡拉病毒鸡卵黄抗体的制备方法，其特征在于：其步骤如下：步骤1）、安卡拉免疫抗原的制备：将检测为安卡拉阳性的病料组织按1：5(w/V)加入含青霉素1000 U/mL和链霉素1000 U/mL的灭菌PBS液；将上述加入PBS液后的组织在捣碎机中捣碎，在‑20℃环境中，反复冻融3次，用无菌医用纱布过滤；在所得的滤液中加入总体积0.5%量的甲醛，置于37℃恒温设备中灭活24h，用0.22 µm的细菌滤器过滤除菌，即可得到安卡拉免疫抗原；步骤2）、蛋鸡的免疫：选取健康蛋鸡，在140日龄时使用安卡拉免疫抗原对健康蛋鸡进行首次免疫，在首次免疫后14日和28日后分别进行加强免疫；首次加强免疫后每隔7天进行抗体检测，收集检测合格的鸡蛋；步骤3）、卵黄抗体粗提液的制备：a）、将检测合格的鸡蛋蛋黄分离后，按照1：8的比例加入pH为5.0的醋酸‑醋酸钠缓冲液进行稀释，将稀释后的蛋黄液pH值调节到5.0，搅拌30min使其形成均匀的蛋黄液；在 4℃环境下静置4‑6小时，取上清液备用；b）、在20℃水浴条件下，向上清液中缓慢加入饱和硫酸铵溶液，边加边搅拌并使硫酸铵的浓度达到40%，在20℃水浴中静置1小时，然后在4℃环境下以3500r/min的转速，将加入硫酸铵后的上清液离心15min，收集沉淀；c）、用与起始蛋黄等体积的灭菌生理盐水溶解所获得的沉淀，用0.45μm的滤膜过滤；d）、将c）中得到的滤液加入生理盐水，使用截留量为30kd的滤膜进行超滤，检测无硫酸铵后停止，所得溶液即为卵黄抗体粗提液；步骤4）、卵黄抗体粗提液的干燥：卵黄抗体粗提液检测合格后，分别加入质量体积比为1：130~180的β‑环糊精、1：150~230的谷氨酸钠、1：5~20的脱脂奶粉、1：10~30的可溶性淀粉后混合均匀，在喷雾干燥器中以190℃进风温度、70℃出风温度的条件进行喷雾干燥，最终制得卵黄抗体干粉制剂。