[发明专利]一种石油降解固定化细菌混悬剂的制备方法

摘要

本发明涉及一种石油降解固定化细菌混悬剂的制备方法，属于石油处理技术领域。针对目前的治理海洋原油渗漏污染时，普通方法治理对环境和人体健康造成伤害，现有细菌固定化治理容易被海水淡化和分散，无法有效地集中，导致成本和效率大大降低的缺陷，提供了一种通过将细菌在原油培养基中驯化处理，通过制备可以分解原油的细菌，将其固定化并有效的提高其分散性和溶解度，使其与原油有效的结合并分解，本发明制备的石油降解固定化细菌混悬剂投加量小，分解效率高，可在2～3周内，对原有污染区域进行有效治疗，分解率可达55～58%；本发明通过训化固定细菌混悬剂进行制备，操作简单，所需成本低。

主权项

一种石油降解固定化细菌混悬剂的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）称取10～15g胰蛋白胨，5～8g猪肉汤，5～8g氯化钠，15～20g琼脂和600～800mL蒸馏水，依次用冰醋酸溶液和质量浓度为10%氨水溶液调节pH至7.0，随后升温加热至115～120℃，搅拌混合15～20min，冷却，制备得固体培养基；按枯草芽孢杆菌与多食鞘氨醇杆菌接种比1:1，将其接种至固体培养基上，在120～150rpm的摇床上振荡培养2～3天，培养得混合菌丝；（2）称取0.1g的原油，加入二氯甲烷定容至100mL的容量瓶中，制备得原油混合液，随后按原油混合液与固体培养基质量比1:5，搅拌混合，得原油培养基，按接种量的10%，将步骤（1）培养的混合菌丝接种至原油培养基中，在30～35℃下，在150～160r/min下摇床振荡培养5～7天；（3）待培养完成后，继续向上述接种完成的原油培养基中加入原油至浓度为 2.0g/L，并置于30～32℃，在150～160r/min下摇床振荡培养5～7h，随后再控制上述条件不变，依次在原油培养基中增加原油浓度至5g/L、6.5g/L和10g/L，分别驯化培养5～7天；（4）待驯化培养完成后，对其过滤并收集滤渣，在120～150r/min下离心分离10～15min后，收集下层沉淀并置于步骤（2）制备的原油混合液中，搅拌混合并在100～120W超声振荡分散10～15min，得原油降解混合菌液；（5）量取0.2～0.5mL上述制备的原油降解混合菌液，将其置于25～50mL质量浓度为1%琥珀酸钠溶液中，在200～250W超声振荡处理10～15min，即可得一种石油降解固定化细菌混悬剂。