[发明专利]检测结核分枝杆菌耐药基因突变位点的引物、探针及方法

摘要

本发明是用液相芯片检测结核分枝杆菌耐药突变位点的引物、探针及方法，其用于检测结核分枝杆菌针对异烟肼、利福平和福诺喹酮类药物这3种药物耐药的基因突变位点。其中异烟肼耐药突变位点位于katG基因和inhA基因，利福平耐药突变位点位于rpoB基因,福诺喹酮类药物的耐药突变位点位于gyrA基因。本发明根据基因库中4种耐药相关基因的核苷酸序列分别进行同源性分析，设计引物和探针，通过两轮PCR，分子杂交，再用Luminex200系统进行检测，从而确定样本中是否含有耐药突变位点。本发明提供的耐药基因突变位点的检测，对于临床采取正确的治疗方案来治疗结核分支杆菌的感染至关重要。本发明具有检测速度快、操作简单、敏感性高、特异性好等优点，利于推广应用。

主权项

1.一种检测结核分枝杆菌耐药基因突变位点的引物组，其特征是一种用MASA液相芯片对临床常见的3种结核分枝杆菌治疗药物的耐药相关基因突变位点进行检测的引物组，该引物组引物是根据基因库中能够检索到的目标基因所有的核苷酸序列分别进行同源性分析和设计的，具体是：（1）用于检测异烟肼耐药相关基因katG基因耐药突变位点的引物F、引物R：其DNA序列是：katG‑F：CTGGTCCGTACTTCCGAGCGGTCGGCGGTCACACTTTCGGTAkatG‑R：TACAGTCGGTCGCGTGCCTCAACGGGTCCGGGATGGTGCC；（2）用于检测异烟肼耐药相关基因inhA基因耐药突变位点的引物F、引物R：其DNA序列是：inhA‑F：CTGGTCCGTACTTCCGAGCGAAGGGATCCGTCATGGTCGAAGTinhA‑R：TACAGTCGGTCGCGTGCCTCGTTGGACACCAGCACCTCGAC；（3）用于检测利福平耐药相关基因rpoB基因耐药突变位点的引物F、引物R：其DNA序列是：rpoB‑F：CTGGTCCGTACTTCCGAGCGGGCGAGCTGATCCAAAACCAGArpoB‑R：TACAGTCGGTCGCGTGCCTCCGACAGCGAGCCGATCAGAC；（4）用于检测福诺喹酮类药物耐药相关基因gyrA基因耐药突变位点的引物F、引物R：其DNA序列是：gyrA‑F：CTGGTCCGTACTTCCGAGCGAGGAGATGCAGCGCAGCTACAgyrA‑R：TACAGTCGGTCGCGTGCCTCCATTGCCTGGCGAGCCGAAGT 。