[发明专利]一种重组华支睾吸虫分泌型磷脂酶A2蛋白及其体外可溶性表达与纯化制备方法

摘要

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种重组华支睾吸虫分泌型磷脂酶A2蛋白及其体外可溶性表达与纯化制备方法。现有表达技术获得的CssPLA2蛋白是包涵体，没有酶活性，即使包涵体复性后酶活性也非常微弱。本发明所述重组CssPLA2蛋白，含有CssPLA2蛋白和MBP标签蛋白。本发明通过广泛而深入的研究，通过特殊表达方式的优化，首次实现了CssPLA2蛋白的可溶性表达，并制备获得了具有生物活性的重组CssPLA2蛋白，有效地克服了现有表达技术中所存在的问题。

主权项

1.一种重组CssPLA2蛋白，含有CssPLA2蛋白和MBP标签蛋白，所述CssPLA2蛋白又称为华支睾吸虫分泌型磷脂酶A2蛋白，所述CssPLA2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述重组CssPLA2蛋白的制备方法，包括如下步骤：(1)获得CssPLA2目的基因，所述CssPLA2目的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；(2)构建重组质粒：将步骤(1)所得CssPLA2目的基因以及载体质粒采用相同的限制性内切酶切割，然后进行连接，获得重组质粒，所述载体质粒为pMAL‑c2X质粒，所述限制性内切酶为Xba1和Hind III；(3)将步骤(2)所得重组质粒导入感受态细胞，转化；(4)筛选阳性克隆，并将正确的重组质粒转化宿主感受态细胞；(5)诱导表达重组CssPLA2蛋白。