[发明专利]一种煤泥水中残留聚丙烯酰胺的生物降解方法

摘要

本发明涉及一种煤泥水中残留聚丙烯酰胺的生物降解方法，尤其是涉及一种利用驯化后的球红假单胞菌降解煤泥水中残留聚丙烯酰胺的方法，其特征在于：包括以下步骤。种子的制备、降解菌的驯化、单菌落的分离、菌悬液的配制、将菌悬液按1～5％的量接种到含聚丙烯酰胺的降解培养基中，在温度为25～40℃，初始pH＝5～7，搅拌速度为100～140r/min时培养5～8d，即可取得较好的降解效果。采用上述方法驯化的球红假单胞菌能以聚丙烯酰胺为唯一氮源进行降解，并取得很好的降解效果，同时不会对环境造成二次污染。

主权项

一种煤泥水中残留聚丙烯酰胺的生物降解方法，其特征在于：包含以下步骤。步骤一、种子的制备。从冰箱保存的球红假单胞菌试管中挑取一环接入到富集培养基中，菌株经活化和扩大培养后，再按体积百分比2％接入到富集培养基中，在温度为30℃，初始pH＝6，搅拌速度为130r/min时培养36h，可得用于驯化的降解菌；步骤二、降解菌的驯化。取上述步骤一制得的种子按体积百分比1～5％接入到含40～80ml富集培养基和10～30ml含聚丙烯酰胺煤泥水的驯化培养基中，在温度为25～40℃，初始pH＝5～7，搅拌速度为100～140r/min时培养54～72h，倒出10～30ml的上清液，然后加入10～30ml含聚丙烯酰胺煤泥水，持续培养4～7d；取第一阶段驯化的菌液按体积百分比1～5％接入到含100～150ml含聚丙烯酰胺煤泥水和30～50ml富集培养基的驯化培养基中，在温度为25～40℃，初始pH＝5～7，搅拌速度为100～140r/min时培养54～72h，倒出30～50ml的上清液，然后加入30～50ml含聚丙烯酰胺煤泥水，持续培养7～10d；步骤三、单菌落的分离。取上述步骤二驯化后的菌株培养液，稀释后涂布于含100mg/L聚丙烯酰胺的基础固体培养基上，在温度为30℃时培养72h，将长出的单菌落在固体培养基上划线纯化两次；步骤四、菌悬液的配制。取上述步骤三纯化后的菌落，接种到富集培养基中，在温度为30℃，初始pH＝6，搅拌速度为130r/min时培养48h，再取培养液于3000转离心10min，倒出上清液，用无菌生理盐水冲洗底部的细菌，采用血球计数器计数，最后配制成10⁹/ml的菌悬液，4℃冰箱保存备用；步骤五、将上述步骤四保存的菌悬液，按体积百分比1～5％接入到基础培养基中，在温度为25～40℃，初始pH＝5～7，搅拌速度为100～140r/min时培养5～8d，即可对聚丙烯酰胺取得较好的降解效果。