[发明专利]南洋楹无性系组织培养的方法

摘要

本发明涉及一种南洋楹无性系组织培养的方法，该方法以南洋楹优良母树种子通过无菌育苗技术获得的无菌苗作为外植体或者采用南洋楹优良母树的萌芽条作为外植体，将外植体经过诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗以后，再移栽至育苗基质中培育。该方法对诱导增殖流程、培养基以及培养条件、炼苗等技术环节进行了优化。通过在诱导培养基中加入胞分裂素6‑BA，在增殖培养时先将组培苗通过28～35天自然散射光培养，将生根与炼苗结合进行，植株移栽时在晴天下午4点半以后或阴天移植，且对各培养基的组分进行优化等有效减少了幼苗玻璃化、黄化现象以及无效愈伤组织的产生，提高了增殖倍率以及成苗率，缩短培养周期，使苗木成活率达到90％以上。

主权项

一种南洋楹无性系组织培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)获取外植体：采集南洋楹优良母树种子，通过无菌育苗技术获得无菌苗，以单株无菌苗作为外植体；或者采用南洋楹优良母树的根颈部位的萌芽条作为外植体；(2)诱导培养：将外植体分段切割，每段含1个顶芽或1～2个腋芽，接入诱导培养基诱导愈伤组织和不定芽，培养1个周期后切除基部老化愈伤组织继续转接，再培养一个周期，每个周期28～35天；所述诱导培养基由以下组分组成：MS培养基、0.4～1.0mg/L细胞分裂素6‑BA、25～35g/L蔗糖、6～8g/L卡拉胶；所述诱导培养基的p H为5.6～6；(3)增殖培养：将芽分化增殖与芽伸长增加腋芽数量增殖相结合，将步骤(2)的愈伤组织和不定芽直接转入增殖培养基，自然散射光培养28～35天后，转接，转为人工光源培养；所述增殖培养基由以下组分组成：MS培养基、0.1～0.3mg/L细胞分裂素6‑BA、0.01～0.05mg/L萘乙酸、25～35g/L蔗糖、6～8g/L卡拉胶；所述增殖培养基的p H为5.6～6；(4)生根培养：不定芽增长到3～5cm时，切下转入生根培养基，培养6～12天；(5)炼苗：将培养瓶移到室外遮阴棚中闭瓶炼苗10～14天，边炼苗边生根，再揭去瓶盖注入清水，注入清水的量为覆盖培养基平面以上0.5～1.0cm，开盖炼苗2～5天；(6)植株移栽：将炼苗后的小苗根部的培养基清洗干净后，于晴天下午的4点半以后或阴天移栽至育苗基质中，覆盖透明塑料薄膜，保湿，培育28～32天后除去塑料薄膜，让其继续生长；所述育苗基质为体积比为3～4：1的黄心土和泥碳土。