[发明专利]基于自锁式适体探针的级联扩增策略的生物分子检测方法

摘要

本发明公开了基于自锁式适体探针的级联扩增策略的生物分子检测方法，该探针至少包括两个部分：对目标物具有特异性识别的3’端的适体序列和5’端的信号转导序列，所述5’端的信号转导序列与部分适体序列杂交，形成5’端茎‑环结构，所述5’端的信号转导序列包含切刻内切酶的识别位点。该探针结合链取代扩增(SDA)和双重指数型滚环扩增(DE‑RCA)策略，实现了蛋白质‑PDGF‑BB和小分子‑腺苷的超灵敏和高特异性检测，检测限分别达3.8×10^‑16mol/L和4.8×10^‑8mol/L。

主权项

1.基于自锁式适体探针的级联扩增策略检测蛋白质的方法，其特征是，所述方法用于非治疗和非诊断的目的，包括以下步骤：(1)链取代扩增反应：将含有目标物的待检测物与自锁式适体探针结合，折叠成三向螺旋结构，打开5’端信号转导序列与部分3’端适体序列形成的茎‑环结构；上述体系在DNA聚合酶、切刻内切酶和dNTP存在时，发生链取代扩增反应，产生大量的引物序列1；(2)双重指数型扩增滚环扩增：将步骤(1)中引物序列1与模板1杂交，触发第一级指数型RCA扩增反应，产生大量的引物序列2；引物序列2与模板2杂交，触发第二级指数型RCA扩增反应，产生大量的G‑四倍体序列，插入荧光分子后，产生荧光信号通过检测到的荧光信号对蛋白质或生物小分子进行定量测定；若是待检测物中不含有目标物时，不发生链取代扩增反应和双重指数型扩增滚环扩增反应，则没有荧光信号；所述目标物为蛋白质；所述蛋白质为血小板源生长因子BB；所述的自锁式适体探针至少包括两个部分：对目标物具有特异性识别的3’端的适体序列和5’端的信号转导序列，所述5’端的信号转导序列与部分适体序列杂交，形成5’端茎‑环结构，所述5’端的信号转导序列包含切刻内切酶的识别位点；所述的自锁式适体探针还包括用来连接适体序列和信号转导序列的连接序列，所述连接序列用来参与形成5’端茎‑环结构；所述的自锁式适体探针在3’端的适体序列还连接配合序列；所述的自锁式适体探针为血小板源生长因子BB的自锁式适体探针，序列：GCT GTG GAT ACT GCT GAG GCC ACA GGC TAC GGCACG TAG AGC ATC ACC ATG ATC CTG TG，如SEQ ID No：6所示；所述模板1核苷酸序列为：TAC TGC TGA GGG AGT TGA GTG CTG AGG GAG TTGAGT GCT GAG GCT GTG GA，如SEQ ID No：4所示；所述模板2核苷酸序列为：AGT GCT GAG GAA ACC CAA CCC GCC CTA CCC GCTGAG GAA ACC CAA CCC GCC CTA CCC GCT GAG GGAGTT G，如SEQ ID No：5所示。