[发明专利]芽胞杆菌基因无痕敲除/入质粒、方法和试剂盒有效
| 申请号： | 201610002428.9 | 申请日： | 2016-01-06 |
| 公开（公告）号： | CN105505975B | 公开（公告）日： | 2018-11-09 |
| 发明（设计）人： | 汪小锋;汪卫;刘艳红;张媛;印容;叶聪 | 申请（专利权）人： | 武汉康复得生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/75 | 分类号： | C12N15/75 |
| 代理公司： | 北京汇泽知识产权代理有限公司 11228 | 代理人： | 程殿军;张瑾 |
| 地址： | 430074 湖北省武汉市东湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了芽胞杆菌基因无痕敲除/入质粒、方法和试剂盒，该芽胞杆菌基因无痕敲除/入质粒的基因组中含有：仅一种正筛选标记的抗性基因；能在大肠杆菌中复制的复制子；能在芽胞杆菌中复制的温敏型复制子；至少一个I‑Scel酶切位点；仅一种显色蛋白基因；其中，抗性基因和显色蛋白基因前的启动子均为芽胞杆菌中的组成型启动子。本发明还提供一种用于提高上述质粒敲除或敲入效率的辅助质粒，其基因组中含有的抗性基因和显色蛋白基因不同于上述敲除/入质粒。采用上述两种质粒，可以连续或迭代修饰芽胞杆菌基因组中一个或多个目的DNA序列，应用于芽胞杆菌的遗传改造、代谢过程研究、功能基因组研究和工业化应用研究等多种领域。 | ||
| 搜索关键词： | 杆菌 基因 无痕敲 质粒 方法 试剂盒 | ||
【主权项】：
1.芽胞杆菌基因无痕敲除/入质粒，其特征在于，该质粒的基因组中含有：仅一种正筛选标记的抗性基因，该抗性基因的启动子为双功能启动子；能在大肠杆菌中复制的复制子；能在芽胞杆菌中复制的温敏型复制子，所述温敏型复制子的核苷酸序列如SEQ ID NO.14~16中的任意一条所示；至少一个I‑Scel酶切位点；仅一种显色蛋白基因，该显色蛋白基因的启动子为组成型启动子；所述双功能启动子是指既能在大肠杆菌中启动基因表达，也能在芽胞杆菌中启动基因表达的启动子。
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