[发明专利]核苷酸多态性检测方法

摘要

提供一种表征DNA分析物的方法，所述DNA分析物包含特征为核苷酸多态性位点的一种或多种多核苷酸类型，每种所述多核苷酸类型包含具有式‑X‑Y‑Z‑的靶标区，其中X和Z分别是第一和第二特征性侧翼寡核苷酸区，并且Y是组成所述位点的变体之一。所述方法的特征在于下述步骤：(a)在连接酶的存在下，使包含来源于至少一种多核苷酸类型的靶标区的单链寡核苷酸与一组未使用的探针反应，所述未使用的探针包含：(i)一种单链第一适体，所述单链第一适体在其3’端以与–X或–X‑Y的序列互补的序列终止，和(ii)一种或多种第二单链适体，所述第二单链适体在其5’端以与–Z‑Y或–Z(当情形可能如此时)的序列互补的序列终止，并且用处在不可检测状态的可检测元件标记，从而产生包含所述寡核苷酸、第一适体、和第二适体中的一种的基本上双链的使用的探针；(b)使用外切核酸酶或表现出外切核酸酶活性的聚合酶将所述使用的探针在3’至5’方向完全或部分消化成其组成的单一核苷酸，它们中的至少一种包含现在处于可检测状态的可检测元件，并且(c)然后检测与现在可检测元件相关的检测特性，由此鉴定Y变体以及因此由其产生的等位基因的性质。还公开了第二镜像方法。还提供了可以在其中实施所述方法的囊泡。所述方法适用于一定范围的诊断筛查应用，包括与遗传病症和癌症相关的突变体等位基因的检测。

主权项

一种用于表征包含特征为核苷酸多态性位点的一种或多种多核苷酸类型的DNA分析物的方法，每种所述多核苷酸类型分别包含具有式‑X‑Y‑Z‑的靶标区，其中X和Z分别是第一和第二特征性侧翼寡核苷酸区，并且Y是组成所述位点的变体中的一种，所述方法特征在于下述步骤：(a)在连接酶的存在下，使包含来源于至少一种所述多核苷酸类型的靶标区的单链寡核苷酸与未使用的探针组反应，所述未使用的探针组包含：(i)一种单链第一适体，所述单链第一适体在其3’端以与–X或–X‑Y的序列互补的序列终止，和(ii)一种或多种第二单链适体，所述第二单链适体在其5’端以与–Z‑Y或–Z(当情形可能如此时)的序列互补的序列终止，并且用处在不可检测状态的可检测元件标记，从而产生包含所述寡核苷酸、第一适体、和第二适体中的一种的部分双链的使用的探针；(b)使用外切核酸酶或表现出双链外切核酸酶活性的聚合酶将所述使用的探针在3’至5’方向完全或部分消化成其组成的单一核苷酸，它们中的至少一种包含现在处于可检测状态的可检测元件，并且(c)然后检测与所述现在可检测元件相关的检测特性，由此鉴定Y变体的性质。