[发明专利]一种罗氏海盘车抗菌多肽的制备方法

摘要

本发明公开了一种罗氏海盘车抗菌多肽的制备方法。其是以罗氏海盘车为原料，切块匀浆后进行酶解，灭酶，离心，留取酶解上清液；将酶解上清液真空浓缩、乙醇沉淀多糖，得去沉淀的上清液；将去沉淀的上清液进行超滤，截留液采用凝胶过滤层析法进行生物活性肽的分离，收集各吸收峰洗脱液；将洗脱液进行抑菌检测，测得具有抑菌活性的吸收峰洗脱液合并后，冷冻干燥，得罗氏海盘车抗菌多肽。本发明的制备方法工艺合理、操作可行。制备的抑菌多肽来源可靠，安全性高，后期研究方便。

主权项

一种罗氏海盘车抗菌多肽的制备方法，其特征在于：其经过下列工艺步骤：(1)原料预处理选取新鲜的罗氏海盘车为原料，用水清洗，切成块状后送入匀浆机中，制得罗氏海盘车匀浆液；(2)蛋白酶解产物的制备将步骤(1)中得到的罗氏海盘车匀浆液加入与其等重量的超纯水，搅拌均匀，再加入2～5% (以底物蛋白含量计，w/w%)海产品水解酶，调整pH值至7.0～8.5，控制温度40～60℃，水解3～5h；水解后加热至90～100℃，保持5～15min灭酶，得酶解液；将酶解液离心，得酶解上清液；(3)浓缩、干燥将步骤（2）中得到的酶解上清液进行真空浓缩至固形物含量为15～30%，冷冻干燥，得固体粉末；(4)去多糖将步骤(3)中得到的固体粉末重新溶解于去离子水中，然后加入无水乙醇至乙醇终浓度为70～90％，静置过夜，离心去除多糖沉淀，留取去沉淀的上清液；(5)超滤将步骤(4)中得到的去沉淀的上清液采用分子量为5000Da的超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于5000 Da的截留液，冷冻干燥，得到罗氏海盘车蛋白酶解产物；(6)生物活性肽的分离将步骤(5)中得到的罗氏海盘车蛋白酶解产物用去离子水溶解为0.2g～0.5g/mL溶液，使用Sephadex LH‑20凝胶色谱柱进行分离，流动相为蒸馏水，洗脱速度为0.8～1.0mL/min，220 nm测定吸光度，收集各吸收峰洗脱液，备用；(7)抑菌活性测定、复合将步骤（6）中得到的各吸收峰洗脱液进行抑菌活性测定；将测定具有抑菌活性的吸收峰洗脱液合并，冷冻干燥，得罗氏海盘车抗菌多肽。