[发明专利]一种从沙冬青提取基因组DNA的方法

摘要

一种从沙冬青提取基因组DNA的方法，包括如下步骤：(1)植物材料液氮速冻研磨成粉；(2)加DNA提取液并加蛋白酶K至20μg/mL，65℃保温；(3)离心收集上清液，加等体积的苯酚:氯仿:异戊醇混合液抽提，再离心收集上清液；(4)加0.6～0.8倍体积异丙醇沉淀DNA；乙醇洗涤，部分干燥后溶于TE缓冲液，得DNA粗提液；(5)向DNA粗提液中加入NaCl至0.5mol/L，再加入CTAB/NaCl溶液，并加入RNase A至终浓度10μg/mL，65℃保温；(6)依次用等体积苯酚:氯仿:异戊醇混合液和等体积氯仿:异戊醇混合液抽提，收集上清液；(7)加0.6～0.8倍体积异丙醇沉淀DNA，再用乙醇洗涤，部分干燥后溶于TE缓冲液，得到高质量的DNA提取液。本发明可以从沙冬青提取高质量的基因组DNA。

主权项

1.一种从沙冬青提取基因组DNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将植物材料经过液氮速冻后，研磨成粉末；(2)往所述粉末中加DNA提取液分散均匀，然后加入蛋白酶K至所述蛋白酶K的终浓度20μg/mL，在65℃下保温1～2h，在保温期间，间歇摇动反应液，其中，所述DNA提取液的体积与所述植物材料的质量之间的比值为15mL:2～5g，所述DNA提取液的成分包含：100mmol/L pH为8.0的Tris‑HCl，150mmol/L NaCl，1％(w/v)的SDS，100mmol/L EDTA，2％(w/v)的PVP；(3)离心除去组织碎片，收集上清液，加入与所述上清液等体积的苯酚:氯仿:异戊醇的混合液抽提2～3次，然后再次离心后收集抽提后的上清液；(4)往步骤(3)中所述抽提后的上清液中，加入0.6～0.8倍体积的异丙醇沉淀DNA，使DNA充分析出得到DNA沉淀；用体积分数为70％～75％的乙醇洗涤DNA沉淀，部分干燥以除去残留乙醇后，将DNA沉淀溶于TE缓冲液，得到DNA粗提液，其中，所述TE缓冲液的体积与所述植物材料的质量之间的比值为9mL:2～5g；(5)往步骤(4)中所得的DNA粗提液中加入NaCl至NaCl的终浓度为0.5mol/L，随后加入CTAB/NaCl溶液，再加入RNase A至RNase A的终浓度为10μg/mL，在65℃下保温一段时间；其中，所述CTAB/NaCl溶液的加入量为每1mL DNA粗提液加入1.5mL CTAB/NaCl溶液；(6)往步骤(5)所得的溶液中加入等体积的苯酚:氯仿:异戊醇的混合液抽提后，离心之后收集上清液；再用与所述上清液等体积的氯仿:异戊醇混合液抽提，离心之后收集上清液；(7)往步骤(6)中得到的抽提后的上清液中加入0.6～0.8倍体积的异丙醇沉淀DNA，使DNA析出，所得DNA沉淀使用体积分数为70％～75％的乙醇洗涤，部分干燥以除去残留乙醇后，将沉淀溶于TE缓冲液中，得到高质量的DNA提取液。