[发明专利]黑老虎的组织培养快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一种黑老虎的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤A、外植体的选择与处理取靠近黑老虎茎尖顶端的幼嫩叶片，消毒处理后得无菌外植体；B、外植体的诱导；C、愈伤组织的防褐化处理；D、愈伤组织的分化；E、继代增殖培养；F、壮苗培养；G、生根培养；H、炼苗与移栽。本发明的组培方法将黑老虎外植体褐化率控制在7％以下，生根率达到95％，成苗率达到97％以上。

主权项

一种黑老虎的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：A、外植体的选择与处理：取靠近黑老虎茎尖顶端的幼嫩叶片，消毒处理后得无菌外植体；B、外植体的诱导：用刀片将无菌外植体去掉叶脉组织，切成1.0cm‑2.0cm的正方形叶块，边缘用刀片划伤，接种到诱导培养基中，在培养温度为24‑26℃，黑暗条件下培养7d，然后在光照强度1500Lux，光照时间为10‑12小时/天的条件下诱导培养21d，获得第一愈伤组织，其中诱导培养基中的配方为：MS、TDZ 1.0‑1.5mg/L、2,4‑D 1.0‑3.0mg/L、NAA 0.1‑1.0mg/L、琼脂4.5g/L和蔗糖25g/L，调整诱导培养基的pH值为5.8；C、愈伤组织的防褐化处理：将第一愈伤组织转接到防褐化培养基中，在培养温度为20‑25℃，黑暗条件下培养7天，得第二愈伤组织，其中防褐化培养基的配方为：MS、6‑BA0.1‑0.5mg/L、硝酸银1.0‑8.0mg/L、琼脂4.5g/L和蔗糖25g/L，调整防褐化培养基的pH值为5.8；D、愈伤组织的分化：将第二愈伤组织用刀片切成2.0cm的正方形叶块，接种到分化培养基中，在培养温度为24‑26℃，光照强度1500Lux，光照时间为10‑12小时/天的条件下培养21天，获得丛生芽苗，其中分化培养基的配方为：MS、6‑BA 1.0‑2.0mg/L、IBA 0.5‑1.5mg/L、琼脂4.5g/L和蔗糖25g/L，调整分化培养基的pH值为5.8；E、继代增殖培养：将丛生芽苗置于增殖培养基中，在培养温度24‑26℃，光照强度2000Lux，光照时间为10‑12小时/天的条件下培养30天得到增殖苗，其中增殖培养基的配方为：MS、KT 0.1‑0.5mg/L、6‑BA0.5‑1.5mg/L、NAA0.2‑1.0mg/L、琼脂4.5g/L和蔗糖25g/L，调整增殖培养基的pH值为5.8；F、壮苗培养：将增殖苗置于壮苗培养基中，在培养温度24‑26℃，光照强度2000Lux，光照时间为10‑12小时/天的条件下培养21天得到健壮苗，其中壮苗培养基的配方为：MS、粉状活性炭0.5‑1.5g/L、6‑BA 0.1‑0.5mg/L、IBA0.1‑0.5mg/L、琼脂4.5g/L和蔗糖25g/L，调整壮苗培养基的pH值为5.8；G、生根培养：将健壮苗置于生根培养基中，在培养温度24‑26℃，光照强度2000Lux，光照时间为10‑12小时/天的条件下培养21天得到带根幼苗，其中生根培养基的配方为：1/2MS、粉状活性炭0.1‑0.5g/L、IBA0.5‑1.5mg/L和NAA0.5‑1.5mg/L、琼脂4.5g/L和蔗糖25g/L，调整生根培养基的pH值为5.8；H、炼苗与移栽。