[发明专利]一种以新鲜蓝藻为基质发酵Bt的方法

摘要

本发明涉及一种以新鲜蓝藻为基质发酵Bt的方法，属农药技术领域。本方法包括：原料选择、Bt GIM1.32菌种活化、发酵、及干燥步骤得到。本发明的有益效果在于：生产Bt的成本大幅降低；生产的Bt在48h时其活菌数达到相对稳定值6.79×10⁸CFU/mL，54h时其芽胞数达到相对稳定值7.01×10⁸CFU/mL；其130ku晶体蛋白质量浓度为4.81mg/mL，对3龄小菜蛾的LC₅₀值为0.180μL/mL，毒力效价为1600.00IU/μL，成品效价高，分散性好，产量大，质量好。按比例扩大后能用于大批量生产。

主权项

一种以新鲜蓝藻为基质发酵Bt的方法，其特征在于该方法的具体步骤如下：(1)原料选择成分及质量百分比为：微囊藻属93.12％，鱼腥藻属1.66％，束丝藻属1.72％，绿藻门2.99％，硅藻门0.51％的新鲜蓝藻；菌株标准编号：FSCC(T)115030，GIMCC编号：GIM1.32的菌种苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)；常规的LB液体培养基：胰蛋白胨：40％，酵母提取物：20％，氯化钠40％；或含固率1‑3％的常规的蓝藻沼液培养基；(2)Bt GIM1.32菌种活化在250‑500mL锥形瓶中装入配置好的100‑200mL常规LB液体培养基并在103.4kPa，121.3℃下灭菌15min；无菌操作台上用浸过70‑80％的酒精脱脂棉擦净菌种冻干管，用火焰加热顶部，滴无菌水使冻干管顶端破裂，用镊子敲破冻干管，取50‑150mg菌种置于LB液体培养基中，在温度25‑35℃、50‑150rpm/min的条件下培养活化5‑20h；用无菌膜封口后放入2℃冰箱冷藏备用；(3)发酵在0.5‑1L锥形瓶中加入100‑300mL LB培养基或含固率1‑3％的蓝藻沼液培养基并在103.4kPa，121.3℃下灭菌15min，每瓶接种1‑3％已活化的pH值为5.0‑8.0的Bt GIM1.32，在温度25‑35℃、50‑150rpm/min的条件下培养发酵40‑60h。大批量生产时按比例扩大；(4)干燥采用‑55℃，4Pa常规真空冷冻干燥法对上述发酵脱水处理，当含水率小于质量百分比5％时即得到发酵Bt原粉。