[发明专利]一种含ACC脱氨酶的PGPR筛选和分离方法

摘要

本发明公开了一种含ACC脱氨酶的PGPR筛选和分离方法。方法包括以下几个步骤：(1)采集；(2)根际菌的分离和纯化；(3)内生菌的分离和纯化。本发明的筛选和分离方法简单，效果好，分离得到的PGPR菌株可以用来作为种子萌发液，在用来萌发球花石楠种子时，发芽率为86％-87.3％，发芽势为72％-73％，平均根长为1.90-1.93cm，没有采用种子萌发液处理的球花石楠种子发芽率为67.7％，发芽势为66％，根长为1.05cm。

主权项

一种含ACC脱氨酶的PGPR筛选和分离方法，其特征在于，包括以下几个步骤：(1)采集：采集植物根系和根际土壤，备用；(2)根际菌的分离和纯化：将采集的根际土壤放于装有滤纸的培养皿内自然风干，5‑7d后称取1g根际土壤，将其溶解于装有10ml无菌水和玻璃珠的锥形瓶里，振荡两小时，吸取1ml浑浊液，加无菌水稀释到10ml，振荡摇匀后吸取1ml浑浊液，将其稀释到10ml，制成菌悬液；然后再吸取50μL菌悬液用涂布器均匀的涂布在用ACC替代其氮源的GTN、M9或DF等培养基平板中，然后用封口膜封口，放置于30±2℃不需光照的恒温培养箱内培养；48‑72h后，挑取单菌落，反复划线验证观察其是否能生长，然后接种于38号培养基划线培养，连续划线3次，得到细菌的纯培养物；(3)内生菌的分离和纯化：根系用自来水洗净泥土等脏物，将根切成约0.5cm的小段，无菌水冲洗3‑5次，Tween‑20处理60s，5％次氯酸钠溶液消毒6min，2.5％的硫代硫酸钠处理10min，无菌水冲洗3‑4次，75％酒精浸泡1min，无菌水洗涤3‑4次，最后将其放入已灭菌的硅胶中，封口放入55℃烘箱中烘干，将已烘干的组织放入已消毒的豆浆搅拌机里打碎成粉末，然后取少许粉末均匀洒在用ACC替代其氮源的GTN、M9或DF等培养基平板中，然后用封口膜封口，放置于30±2℃不需光照的恒温培养箱内培养；48‑72h后，挑取单菌落，反复划线验证观察其是否能生长，然后接种于38号培养基划线培养，连续划线3次，得到细菌的纯培养物。