[发明专利]一种高效的DC细胞XBP1基因敲除方法在审
| 申请号： | 201510814335.1 | 申请日： | 2015-11-23 |
| 公开（公告）号： | CN105602987A | 公开（公告）日： | 2016-05-25 |
| 发明（设计）人： | 不公告发明人 | 申请（专利权）人： | 深圳市默赛尔生物医学科技发展有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/0784 |
| 代理公司： | 深圳中一专利商标事务所 44237 | 代理人： | 左光明 |
| 地址： | 518052 广东省深圳市龙华新区龙华街道*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种高效率的DC细胞XBP1基因敲除方法。本发明DC细胞XBP1基因敲除方法包括基因敲除靶点和寡核苷酸设计、寡核苷酸退火反应处理、酶切线性化载体、线性化载体与双链寡核苷酸连接反应和转化感受态细胞以及DC细胞XBP1基因敲除等步骤。本发明DC细胞XBP1基因敲除方法采用改良的CRISPR/pCas9基因敲除系统，以XBP1为靶基因进行CRISPR靶向序列设计并制备出pCas9/gRNA1-XBP1质粒，进一步在L189药物的处理作用下使其对DC细胞进行转染，从而能高效的敲除DC细胞内的XBP1基因，有效保证了DC细胞的免疫刺激作用，有效发挥了DC细胞抗肿瘤免疫作用。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 高效 dc 细胞 xbp1 基因 方法 | ||
【主权项】：
一种高效的DC细胞XBP1基因敲除方法，包括如下步骤:以内质网压力感受因子XBP1为靶基因进行CRISPR靶向序列设计，并根据所述CRISPR靶向序列设计正向寡核苷酸序列和反向寡核苷酸序列；将所述正向寡核苷酸序列和反向寡核苷酸序列进行退火反应处理形成双链寡核苷酸；酶切pCas9/gRNA1载体获得线性化载体；将所述双链寡核苷酸与所述线性化载体在连接反应体系中进行连接反应处理，获得连接产物；将所述连接产物转化感受态细胞，并将被转化后的细胞进行扩大培养后进行质粒提取处理，获得pCas9/gRNA1‑XBP1质粒；将所述pCas9/gRNA1‑XBP1质粒对DC细胞进行转染培养处理。
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