[发明专利]一种鸡新城疫病毒灭活疫苗制备方法

摘要

本发明提供一种鸡新城疫病毒灭活疫苗制备方法，本发明采用鸡胚成纤维细胞取代利用鸡胚绒毛尿囊膜接种方式繁殖鸡新城疫病毒，节省了疫苗制备成本，各批间质量差异降低，产量大，病毒毒价和疫苗质量提高；本发明利用均质机对疫苗进行乳化，制备的疫苗为，相对于传统的油包水剂型而言该疫苗粘度低，粒度小，易吸收；本发明选用的佐剂在疫苗制备过程中无需要额外添加任何表面活性剂成分，制备的疫苗安全性好，避免了传统油佐剂难以吸收造成的副作用。

主权项

一种鸡新城疫病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)制备原代CEF细胞，当细胞长至单层时接种鸡新城疫病毒。2)当细胞出现80％以上病变时，收获细胞培养物，反复冻融3次，得到含上清液的细胞毒液。3)测定病毒效价，病毒的效价应≥106.5TCID50/0.1mL。4)将检验合格的细胞毒液置于无菌容器内进行灭活处理，加入甲醛溶液充分摇匀，甲醛溶液的加入量为灭活溶液体积的0.5‰‑2‰，控制温度在37℃灭活12‑48h，转速为180r/min。5)将灭活的病毒进行灭活检验，确定最佳的灭活时间及甲醛浓度。6)将灭活的病毒液与进口佐剂MONTANIDETMISA 206VG按1:1比例(w/w)或75:87比例(v/v)混匀，利用ATS Engineering Inc公司的AH100D型均质机对疫苗进行了乳化进行乳化，制备的灭活疫苗。